徐 凡，张艳美

(汕头大学医学院药理学教研室，广东 汕头 515041)

线粒体是真核细胞的一类具有内外双层膜的亚细胞器[1]，作为细胞的“能量工厂”，细胞所需90%的能量来自线粒体的氧化磷酸化作用[2]。心肌缺血再灌注损伤、阿尔茨海默病、糖尿病和衰老等与线粒体的功能障碍有密切关系[3]。线粒体在心肌细胞中含量丰富，约占细胞容积的30%，常被分离出来作为单独的细胞器进行研究[4]。由于心肌组织结构致密，相对于其他组织，匀浆所需的机械强度较高。不当的组织匀浆方法往往造成线粒体结构与功能损伤，影响研究结果，因此选用合适的匀浆方法，既确保分离线粒体的纯度又保证其结构功能的完整性，有着至关重要的意义。本研究探讨研磨珠匀浆法、乳化分散仪法、玻璃匀浆器法三种不同的匀浆方法对分离小鼠心肌组织线粒体质量的影响，从而确定更优化的心肌组织线粒体分离方案。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 实验动物 C57BL/6JNifdc小鼠购自浙江维通利华实验动物技术有限公司，雄性，8～12周龄，体重18～23 g，生产许可证号：SCXK(浙)2019-0001。实验所用的饲料，饮用水和垫料经过高压灭菌处理，饲养过程严格遵守实验动物的3R原则。小鼠随机分为研磨珠匀浆法组、乳化分散仪法组、玻璃匀浆器法组，每组3～5只。

1.1.2 主要材料、试剂与仪器 戊巴比妥钠(德国Merck公司)，组织线粒体提取试剂盒和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)(上海碧云天生物技术有限公司)，BCA蛋白定量试剂盒(美国Thermo Fisher Scientific公司)，COXⅣ单克隆抗体和GAPDH单克隆抗体(美国Cell Signaling Technology公司)，HRP标记的山羊抗兔IgG(武汉博士德生物工程有限公司)。……