游云悠，魏友煜，左 越，黎威巍，罗丽丹，金科华**

(1.湖北科技学院医药研究院，湖北 咸宁 437100；2.湖北科技学院基础医学院)

转氨基作用与氨基酸纸层析是一个重要的综合性生化实验，现有的各大高校实验教程只有简单的操作流程，缺乏创新。笔者在做该实验时思考了以下问题：可否用其他缓冲液代替磷酸缓冲液？转氨基时间能否缩短？当小白鼠数量不够时，肝匀浆可否稀释使用？未用完的肝匀浆保存一段时间是否还有活性？添加辅酶-磷酸吡哆醛(pyridoxal phosphate，PP)能否加快转氨基反应？通过回答这些问题，我们改进了转氨基作用与氨基酸纸层析的方式方法，极大提高了实验效率，现与同行分享。

1 材料与方法

1.1 试剂

磷酸二氢钠、磷酸二氢钾为天津市科密欧化学试剂有限公司产品，磷酸氢二钠为天津市致远化学试剂有限公司产品，Tris购自上海生工生物工程股份有限公司，氢氧化钠为国药集团产品，巴比妥钠为天津市红岩化学试剂厂产品，丙氨酸为上海如吉生物科技有限公司产品，α-酮戊二酸、谷氨酸、PP购自阿拉丁集团，茚三酮为无锡市展望化工试剂有限公司产品，以上试剂均为分析纯。双圈牌滤纸为杭州沃华化学试剂有限公司产品。

按刘汉才等[1]的方法配制0.01mol/L pH 7.4的四种缓冲液：Tris-HCl缓冲液(缓冲液1)，磷酸缓冲液(缓冲液2)，磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(缓冲液3)，巴比妥钠-HCl缓冲液(缓冲液4)。再用每种缓冲液分别配制浓度均为0.1mol/L丙氨酸、α-酮戊二酸和谷氨酸，用NaOH将三者的pH调至7.4。

饱和PP溶液的配制：取10mg PP，加1mL缓冲液2，室温涡旋振荡5min，室温5000r/min离心5min，取上清小份分装，4℃保存备用。……