郭苗苗，刘龙飞，谢梦晓，吴志皎，罗 灿，彭明玉，赵 聃，张 婧，邱 文，王迎伟

南京医科大学免疫学系，江苏 南京 211166

系膜增生性肾炎（mesangial proliferative glomer⁃ulonephritis，MsPGN）是人类常见的肾小球疾病，其病变特征是肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell，GMC）的异常增生和细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的过量堆积，最终可致肾纤维化和硬化［1］。大鼠Thy⁃1N 是一种普遍用于MsPGN 研究的动物模型［2］。本课题组以往研究已表明，Thy⁃1N 发病具有亚溶解C5b⁃9（sublytic C5b⁃9）的依赖性。体外用sublytic C5b⁃9 刺激GMC 后可引起细胞增生和产生促炎因子等［3-4］，但截至目前，有关sublytic C5b⁃9促进GMC增生的分子机制并不十分清楚。

本课题组前期研究发现，在Thy⁃1N大鼠发病早期的肾组织和受sublytic C5b⁃9 刺激的GMC 中，具有组蛋白乙酰基转移酶（histone acetyltransferase，HAT）活性的GCN5和转录因子SOX9以及Cyclin D1的表达均同期上调。已知GCN5既可乙酰化修饰组蛋白和非组蛋白（如转录因子），又能作为辅助激活因子促进靶基因的转录［5］。再者，SOX9也可促进肿瘤细胞的增殖［6-7］，而Cyclin D1 的表达升高则能诱导细胞从G1期进入S期［8］。提示这3种基因的表达上调均是细胞增殖重要的调控因子。鉴于GCN5和SOX9分别是一种兼有HAT的转录辅激活因子和含锌指结构的转录因子，而Cyclin D1又是细胞周期家族的一个成员，故在sublytic C5b⁃9刺激的GMC中升高的GCN5 对Cyclin D1 基因表达有何影响，以及GCN5可否乙酰化修饰SOX9目前并不知晓，本研究对此进行了探讨。

1 材料和方法

1.1 材料

大鼠GMC细胞株（HBZY⁃1）购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。pIRES2/GCN5（带Flag标签）和pcDNA3.1⁃SOX9（带HA 标签）过表达质粒、GCN5酶活性失活突变质粒（570 位谷氨酸突变为丙氨酸，简称ΔGCN5）均由本课题组刘龙飞博士构建并惠赠。此外，pGL3⁃Cyclin D1 启动子全长（+105～+130 nt）质粒由本课题组谢梦晓博士构建并惠赠。……