汪冬艳，张静静

1南京医科大学第一附属医院普外科，江苏 南京 210029；2南京中医药大学附属中西医结合医院，江苏省中西医结合医院普外科，江苏 南京 210028

转录因子YY1是锌指蛋白家族中的一员，参与了许多生物学和生理过程，包括胚胎发生、细胞增殖、DNA复制和分化等［1-3］。本课题组先前研究表明YY1 在胰腺癌中具有抑癌作用［4-5］。染色质免疫共沉淀⁃ 测序（chromatin immunoprecipitation high ⁃throughput sequencing，ChIP⁃seq）结果表明YY1可以直接与长链非编码RNA SOX2OT的启动子区结合［6］，表明YY1 可能调控SOX2OT 的转录，SOX2OT 可能参与胰腺癌的发生和进展。本研究以人胰腺癌细胞株BXPC⁃3 和PANC⁃1 为研究对象，探讨YY1/SOX2OT 轴在胰腺癌细胞迁移和侵袭中的作用，为YY1作为胰腺癌早期诊断、预后及治疗的靶标提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

人胰腺癌细胞株BXPC⁃3 和PANC⁃1 购于上海细胞所；YY1过表达及YY1干扰的稳转细胞株由本实验室构建及保存［4］；PBS、胰酶、DMEM 高糖培养基、胎牛血清（Wisent 公司，加拿大）；双抗（青、链霉素）、RIPA 细胞裂解液、PMSF、BCA 蛋白浓度测定试剂盒、GAPDH 抗体、二抗（上海碧云天）；TRIzol、Lipofectamine 3000 转染试剂（Invitrogen 公司，美国）；反转录试剂盒、SYBR green master mix、蛋白Marker（Bio⁃Rad公司，美国）；PVDF膜、ECL试剂盒、Transwell 小室（Millipore 公司，美国）；Matrigel 基质胶（BD公司，美国）；细胞培养耗材（Corning公司，美国）；YY1抗体（Abcam公司，美国）；其他常用试剂均为国产分析纯；引物由上海吉玛设计合成；siRNA片段由广州锐博设计合成；定量PCR 仪为美国ABI Stepone plus 型号；倒置荧光显微镜为美国Nikon Ti⁃E 型；成像分析系统为美国Protein simple Fluo⁃rchem 型。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

BXPC⁃3 和PANC⁃1 细胞使用含10%胎牛血清、50 U/mL青霉素和50 mg/mL链霉素的DMEM高糖培养基，在37 ℃、5%CO2饱和湿度下培养，待细胞融合率为70%左右时，以0.25%胰蛋白酶、0.02%乙二胺四乙酸消化、传代。……