王宇龙 尚千铅 张帆 杨海燕 楚海娇

摘 要：以玉米干种子为提取材料，采用磁性纳米微球作为吸附介质进行基因组DNA的提取，分别探讨不同裂解液、裂解温度、时间和磁珠用量对基因组DNA提取效率的影响。结果表明裂解液2%CTAB、裂解温度65 ℃、裂解时间10 min、磁珠用量15 ?L时基因组DNA提取浓度高、纯度好、适宜后续实验。

关键词：玉米;DNA;提取

Abstract：Using maize seeds as materials， extracted the genomic DNA by magnetic nanospheres.The results showed that when the lysate was 2%CTAB， the pyrolysis temperature was 65 ℃， the time was 10 min and the dosage of magnetic beads was 15 ?L， the genomic DNA extraction concentration was high， the purity was good， and it was suitable for subsequent experiments.

Key words：Maize; DNA; Extraction

玉米转基因成分的检测主要是基于基因水平的检测，PCR技术是常用的检测手段，而高质量的DNA是后续PCR检测成功与否的前提条件[1]。针对玉米的DNA提取最常用的方法是CTAB法，而传统的提取方法存在操作过程繁琐、耗时耗力、使用有毒溶剂及不能自动化提取等缺点[2]。为克服以上缺点，本试验采用近年来在核酸分离纯化领域备受瞩目的磁珠分离技术，以玉米干种子为提取材料进行DNA提取，同时对提取条件进行优化，建立了一种玉米干种子DNA提取的磁性分离方法，旨为玉米转基因快速检测提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

玉米干种子，由吉林农业科技学院农学院提供;磁珠，由吉林化工学院提供。

1.2 方法

1.2.1 样品处理

取玉米干种子若干粒，于粉碎机中粉碎成粉末。

1.2.2 提取步骤

①称取0.04 g玉米粉末转移至预先装有400 μL裂解液的无菌离心管中，迅速颠倒混匀。②水浴10 min，每隔5 min颠倒混匀。③12 000 r·min-1离心5 min后将上清液移至新的1.5 mL无菌离心管中。④加入与上清液等体积的异丙醇及一定体积的磁珠工作液，振荡混匀。⑤用磁分离架分离磁珠并弃上清。⑥加入900 μL漂洗液洗涤3次，分离磁珠弃上清，吹干磁珠后加入100 μL洗脱液，充分混匀，65 ℃水浴10 min。……