杨玉霞，罗艳丽，张慧玲，汪　艳，陈　勇，*，裴建华

（1.新疆农业大学新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室，新疆乌鲁木齐830052；2.新疆农业大学草业与环境科学学院，新疆乌鲁木齐830052）

毕赤酵母不同甲醇利用表型M ut+和M uts表达FsGLUm基因的比较

杨玉霞1，罗艳丽2，张慧玲1，汪艳1，陈勇1，*，裴建华1

（1.新疆农业大学新疆肉乳用草食动物营养与饲料重点实验室，新疆乌鲁木齐830052；2.新疆农业大学草业与环境科学学院，新疆乌鲁木齐830052）

将来源于产琥珀酸丝状杆菌的β-葡聚糖酶基因根据毕赤酵母的偏好性进行密码子优化，通过全基因合成该优化基因（FsGLUm）并构建重组表达载体pPIC9K-FsGLUm。将pPIC9K-FsGLUm分别用SalⅠ和BglⅡ酶切线性化后电击转化入毕赤酵母GS115染色体DNA中，经过表型筛选和抗性筛选获得不同甲醇利用表型Mut+和Muts阳性菌株。经刚果红平板检测，在摇瓶水平下，Mut+型菌株表达产物产生的水解透明圈明显大于Muts型菌株表达产物。在发酵罐水平下，Mut+型菌株各时间段表达产物酶活性明显高于Muts型菌株。Mut+型菌株表达的酶活性在甲醇诱导96h达到最大值，为6424U/mL，比活性为2607U/mg，菌体干重为123.6g/L。Muts型菌株表达的酶活性在诱导后108h达到最大值，为119U/mL，比活性为1867U/mg，菌体干重为113.5g/L。以上结果表明，Mut+型毕赤酵母更有利于产琥珀酸丝状杆菌β-葡聚糖酶基因的表达。

产琥珀酸丝状杆菌，β-葡聚糖酶，毕赤酵母，甲醇利用表型

1，3-1，4-β-D-葡聚糖酶（EC 3.2.1.73，简称β-葡聚糖酶）在食品、饲料和纺织等领域具有广泛的应用［1-2］。目前，β-葡聚糖酶主要来源于可培养的细菌和真菌［3-4］。研究发现，在反刍动物瘤胃中，产琥珀酸丝状杆菌（Fibrobacter succinogenes）产生的β-葡聚糖酶（FsGLU）具有较高的比活性。……