唐吉思，布日额，吴金花，孙立杰，薛晓阳，刘 洋，丁 铲

(1.内蒙古民族大学生命科学学院，内蒙古通辽028043；2.内蒙古民族大学动物科技学院，内蒙古通辽028043；3.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241)

牛乳腺炎(Bovine mastitis)是影响牛乳业发展的最主要奶牛疾病之一，该病不仅给乳业造成严重的经济损失，而且也是造成乳品污染和引起中毒的主要因素之一，防治该病具有重要的公共卫生学意义[1-2]。由金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)引起的奶牛乳腺炎占牛乳腺炎病例的50%左右[3]，该致病菌产生耐热性强金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcus aureusenterotoxin，SE)，引起食物中毒，研究表明人体摄入1 μg SE即能引起中毒[4]。其产生的SE有A、B、C、D、E、G、H及 I等 8种[5-7]。其中SEA和SEB经100℃2 h才能够被破坏，目前乳品生产工艺中的灭菌条件均不能使其灭活或破坏，因此造成严重的安全隐患。建立一种快速、定量检测原料乳中S.aureusSEA基因的方法，对保障乳制品的安全具有重要意义。

1 材料和方法

1.1 菌株及试剂 产SEA的S.aureus(ATCC13565)标准菌由东北农业大学乳品中心惠赠；其它参考菌为产 SEB的S.aureus(CMCC 26074)、产 SEC的S.aureus(CMCC 26075)、无乳链球菌(CIVDC 1886，C55901)、大肠杆菌(CICC 10389)、嗜热链球菌(CICC 6063)、伤寒沙门氏菌(CMCC 50071)等均购自中国兽医药品鉴定所；大肠杆菌DH5α及JM109、TaqDNA聚合酶、dNTP、PCR buffer购自宝生物工程(大连)有限公司；3株产SEAS.aureus为本实验室分离鉴定；pGEM-T easy载体、染料SYBR GreenⅠmix购自广东东盛生物科技有限公司；质粒提取试剂盒购自北京庄盟国际生物基因科技有限公司；DNA回收试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司。

1.2 目的基因扩增

1.2.1 细菌培养 将S.aureus于营养琼脂培养基上划线培养，37℃过夜，挑取单菌落接种于营养肉汤培养基，37℃过夜培养后待用。……