魏莹莹，胡翔宇，祖丽皮耶·艾尔肯，龚卫娟，贾筱琴

扬州大学医学院基础医学系，江苏 扬州 225001

microRNA（miRNA）是一类内生的、长度约为20～24个核苷酸的非编码RNA，不仅参与细胞增殖、发育、分化、凋亡等基本生理过程，还和肿瘤、炎症等病理过程有着密切关系［1］。miR-16和miR-15a基因复合体定位于人类基因组13q14，该位点基因的突变与慢性淋巴细胞性白血病以及黑色素瘤、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌等多种实体肿瘤，有着密切的关系［2］。miR-16/miR-15a可以直接靶向多种致癌基因，也可以靶向抑制生长因子的分泌，从而发挥抗肿瘤活性［3-4］。

NKG2D 是表达于自然杀伤（natural killer，NK）和CD8+T细胞的重要活化性受体之一［5］。NKG2D转录后水平可受miRNA调控，如miR-182可与NKG2D的3′-非翻译区（3′-UTR）结合下调NKG2D 表达［6］。通过生物信息学分析，我们在小鼠NKG2D 基因3′-UTR 区发现了miR-16 结合的互补基因区（图1），然而miR-16 是否通过调节NK 细胞NKG2D 的表达进而参与肿瘤的调控，目前尚不清楚。

图1 miR-16与NKG2D 3′-UTR的互补序列Figure 1 Complementary sequence of miR-16 and NKG2D 3′-UTR

本研究观察了MC38 结肠癌移植瘤在8 周龄miR-16/15a-/-小鼠体内的生长情况，以及生理及荷瘤状态下NKG2D+NK 细胞和NKG2D-NK 细胞内miR-16表达的变化。同时利用miR-16/15a-/-小鼠研究生理及荷瘤后NK细胞的活性变化，为深入了解miR-16调节NK细胞生物学活性提供重要实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及细胞系

miR-16/15a-/-小鼠为本实验室自美国Jackson实验室引进，并于扬州大学比较医学中心繁殖，C57BL/6 小鼠购自扬州大学比较医学中心，所有使用实验动物均为8 周龄。饲养环境为：温度20～25 ℃，湿度50%左右，正常昼夜更替，12 h 光照/12 h无光照交替进行的方式模拟，自由饮水进食。所有动物实验严格按照动物实验规范执行。……