肖 逸，王胜婵，王易欣，臧松松，张 炜

1南京医科大学第一附属医院泌尿外科，江苏 南京 210029；2南京医科大学附属逸夫医院泌尿外科，江苏 南京 211100；3 南京医科大学附属老年医院泌尿外科，江苏 南京 210024；4 南京医科大学公共卫生学院卫生毒理系，江苏 南京211166

甲基苯丙胺（methamphetamine，METH）是一种具有强烈神经毒性的苯丙胺类兴奋剂［1］。研究表明，METH的神经毒性与小胶质细胞的激活有关［2］。小胶质细胞是中枢神经系统（central nervous system，CNS）中最重要的免疫细胞，正常情况下，小胶质细胞处于静息状态，而受到有害刺激后，小胶质细胞被激活，释放出肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）等炎症因子［3］。小胶质细胞发生持续的激活，可导致其周边神经组织的炎症损伤。Toll样受体（Toll like receptor，TLR）在小胶质细胞中广泛表达，该受体家族激活后作用于下游炎性信号分子，促使编码炎症的相关分子及细胞因子的基因转录［4-5］。然而，TLR是否参与METH引起的神经炎性反应尚不清楚。

本研究通过建立原代小胶质细胞METH染毒模型，旨在探讨TLR及其下游炎性信号及因子介导的炎性反应，从而为METH的干预提供潜在靶点。

1 材料和方法

1.1 材料

METH（中国食品药品检定研究院，纯度：99.9%），PrimeScriptTMRT Reagent Kit 反转录试剂盒（TaKaRa 公司，日本），小鼠IBA-1 单克隆抗体（Proteintech 公司，美国），小鼠Phospho-NF-κB p65（Ser536）单克隆抗体、兔NF-κB p65（D14E12）单克隆抗体（Cell Signaling Technology 公司，美国），HRP标记的羊抗兔IgG（H+L）及HRP 标记的羊抗小鼠IgG（H+L）（Jackson Immuno 公司，美国），磷酸酶抑制剂（Roche 公司，瑞士），细胞裂解液、蛋白酶抑制剂、小鼠β-actin 单克隆抗体（Sigma 公司，美国），PVDF膜、ECL发光液（Millipore公司，美国）。

1.2 方法

1.2.1 原代小胶质细胞培养

孕18 d SD大鼠（购买于南京医科……