吴芳 李莉 黄彭 邸阳阳 嫣珍 魏琴

摘要 [目的]研究艳山姜叶片和果实所含的化学成分，并测定叶片和果实中总黄酮的含量。[方法]采用系统预试验法对艳山姜叶片和果实的水、95%乙醇、石油醚提取液进行化学成分研究;以芦丁为对照品，采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定艳山姜叶片和果实中总黄酮的含量。[结果]艳山姜叶片和果实中均含有酚类、鞣质、有机酸、甾体、三萜以及挥发油、总黄酮;叶片中可能含生物碱，果实中不含生物碱;叶片和果实中不含皂苷，叶片和果实中总黄酮含量分别为13.05、11.98 mg/g。[结论]该研究初步确定了艳山姜叶片和果实中化学成分类型并测定了总黄酮含量，可为进一步研究其活性成分的提取分离及探索其化学成分与药理活性之间的关系奠定基础。

关键词 艳山姜;叶片和果实;化学成分;预试验;总黄酮含量

中图分类号 R284 文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2021）09-0172-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.09.046

Abstract [Objective]To study the chemical components of leaves and fruits of Alpinia zerumbet，and to determine the content of total flavonoids in leaves and fruits.[Method]The extraction of leaves and fruits with water，95% ethanol and petrol ether was respectively experimented by comprehensive preliminary tests.Using rutin as substance control，the contents of total flavonoids in leaves and fruits were measured by colorimetric method with sodium nitrite-aluminum nitrate-sodium hydroxide.[Result]The leaves and fruits of Alpinia zerumbet contained phenols，tannins，organic acids，steroids，triterpenoids，volatile oils and total flavonoids.There may be alkaloids in leaves but no in fruits.Saponins were not found in leaves and fruits.The contents of total flavonoids in leaves and fruits were 13.05 and 11.98 mg/g，respectively.[Conclusion]This study initially determines the types of chemical components in the leaves and fruits of Alpinia zerumbet，and determines the content of total flavonoids，which can lay a foundation for further research on the extraction and separation of its active components and the exploration of the relationship between its chemical components and pharmacological activities.

Key words Alpinia zerumbet;Leveas and fruits;Chemical components;Preliminary tests;Content of total flavonoids

艷山姜[Alpinia zerumbet（pers.）]，是姜科（Zingiberaceae）山姜素属（Alpinia Roxb.）植物，广布于我国南方各省区，是民间用于驱寒暖胃的良药[1];其果实具有温中燥湿、行气止痛、截疟的功效[2]，我国许多地区习用果实及根茎入药，而叶片常被废置丢弃。艳山姜的叶在巴西作为一种药茶在民间使用，具有降低血压、利尿和抗溃疡的作用[3]，国外也有对艳山姜叶挥发油应用研究的报道[4]。目前国内对于艳山姜挥发油成分研究较多[5-6]，对艳山姜化学组成的系统研究还比较缺乏。该研究对该植物果实和叶片中化学成分进行系统预试验，为其化学成分的系统研究和有效成分的分离奠定基础。

黄酮类化合物是一类天然的抗氧化剂，不仅具有很强地清除自由基的能力，而且在抗衰老、抗血栓、降血压、降血脂、 降糖等方面表现出明显的药理活性[7]，因此有必要对艳山姜中总黄酮含量进行测定。为明确其化学成分类型，该研究通过预试验初步探索艳山姜叶片和果实的化学成分类型及差异，并采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定叶片和果实中总黄酮含量，以期为进一步研究其活性成分的提取分离及探索其化学成分与药理活性之间的关系提供试验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试材。艳山姜叶片和果实，宜宾市屏山县八一专业合作社提供。

1.1.2 仪器与设备。SYD-175粉碎机（上海东亚压力容器制造有限公司）;AL204电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）;DHG-9140A电热恒温干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）;HH-S4数显恒温水浴锅（上海雷诺仪器厂）;PHS-3B精密pH计（佑崎有限公司）;T6紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）;SY-3000A旋转蒸发仪（上海贤德实验仪器有限公司）;SB-600DTY扫频超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）;SHZ-D（Ⅲ）循环水真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）;DLSB-5/20 ℃低温冷却循环泵 （郑州长城科工贸有限公司）。

1.1.3 试剂。

氢氧化钠、无水乙醇、溴甲酚绿、溴酚蓝、碘化汞钾、碘化铋钾、硅钨酸、浓硫酸、铁氰化钾、氯化钾、三氯化铁、三氯化铝、石油醚、盐酸、氨水均为国产分析纯，其他试剂均为自配，水为蒸馏水。芦丁标准品（98%），贵州迪大科技有限责任公司。

1.2 化学成分预试验

取艳山姜叶片和果实适量，分别置60 ℃烘箱干燥4 h，经粉碎机粉碎，过40目筛备用。具体供试品溶液的制备方法如下：

（1）水供试液。分别取叶片和果实样品粗粉10 g，加水100 mL，冷浸24 h，滤过，弃滤液。滤渣在60 ℃水浴下加热30 min，滤过，取滤液进行有机酸、皂苷、酚类及鞣质等的检查。

（2）乙醇供试液。分别取叶片和果实部位样品粗粉30 g，加95%乙醇300 mL，60 ℃水浴回流1 h，滤过，滤液浓缩至浸膏状（叶提取液加入蒸馏水使其含醇量为70%，放冷后滤过，滤液用等量石油醚分别萃取2次，以除去叶绿素等）。将浓缩好的样品分为2份：①1/3量加10 mL乙醇溶解，制成醇溶液，进行酚类和鞣质、有机酸、总黄酮、甾体及三萜的检查;②剩下2/3量加盐酸20 mL，充分搅拌，滤过，溶于盐酸的部分进行生物碱的检查。

（3）石油醚供试液。分别取叶片和果实样品粗粉10 g，加入100 mL石油醚（沸程60～90 ℃），室温密封放置3 h后抽滤，滤液浓缩后进行甾体及三萜、挥发油的检查。

1.3 总黄酮含量的测定

1.3.1 供试品溶液的制备。

精密称取样品粗粉5 g，置锥形瓶中，加入100 mL 70%乙醇，70 ℃恒温回流5 h，滤过，得乙醇提取液，用70%乙醇溶液定容至100 mL，即得。采用盐酸-镁粉试验、三氯化铝试验和氨熏试验检查黄酮成分。

1.3.2 标准品溶液的制备。精密称取芦丁标准品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加 70%乙醇溶解并定容，摇匀，得200 μg/mL的标准品溶液。

1.3.3 标准曲线的绘制。

参考孙玉婉等[8]方法进行。精密移取标准品溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，各加入0.3 mL 5% NaNO2摇匀，放置6 min，再加入0.3 mL 10% Al（NO3）3摇匀，放置6 min，最后加入4 mL 4% NaOH、0.4 mL 蒸馏水，70%乙醇定容至10 mL，放置15 min。于500 nm波长处测定吸光度，以对照样品加入量为0 mL的溶液作空白对照。以芦丁标准品溶液的质量濃度（C）为横坐标、吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，求出回归方程。

1.3.4 总黄酮含量的测定。根据标准曲线回归方程，计算总黄酮含量。按以下公式计算：

式中，C为根据回归方程计算得到的总黄酮浓度（mg/mL），10为测定时定容体积（mL），Va为提取液的总体积（mL），Vb为测定时所用体积（mL），M为称取的样品质量（g）。

2 结果与分析

2.1 化学成分系统预试验结果

水供试液、95%乙醇供试液和石油醚供试液的预试验结果见表1。根据预试验结果，若检查某类成分的结果为正反应，则初步判断艳山姜叶片或果实含有某类成分;若部分为正反应或成分干扰导致结果难以判断，则判断可能含有某类成分;若均为负反应，则判断不含某类成分。综合表1结果，艳山姜叶片和果实中所含有的成分有一定的差异。酚类和鞣质、有机酸反应都为阳性，且正反应现象明显，说明艳山姜叶片和果实中均含有酚类和鞣质以及有机酸;叶片和果实中总黄酮的反应均为强阳性，说明艳山姜叶片和果实中含总黄酮;叶片中生物碱的碘化汞钾反应为阴性、碘化铋钾和碘-碘化钾反应为阳性，果实中生物碱的反应均为阴性，说明叶片中可能含生物碱，果实中不含生物碱;皂苷检测反应均为阴性，说明艳山姜叶片和果实中不含皂苷。另外，试验结果表明，艳山姜叶片和果实中有甾体和三萜以及挥发油。

2.2 总黄酮含量测定 采用比色法测定艳山姜叶片和果实中总黄酮含量，根据芦丁标准曲线（图1），得回归方程A=7.123 8C-0.026 7（R2=0.999 9），芦丁标准品溶液在0.01～0.10 mg/mL线性关系良好，可根据样品吸光度，利用该回归方程，计算出样品总黄酮的质量浓度。根据回归方程，得到叶片和果实样品中总黄酮的平均质量浓度分别为0.089、0.082 mg/mL（n=3）。根据公式（1）计算，叶片和果实中总黄酮含量分别为13.05、11.98 mg/g。

3 结论与讨论

艳山姜传统药用部分为其干燥成熟的果实，茎叶常常被丢弃，研究表明，果实中主要含有酚类[9]、黄酮类[10]、甾醇[10]和萜类化合物[11]，茎叶中主要化学成分为黄酮类[12]、酚类[13]、吡喃酮[12-13]、苯丙素类[14]和甾醇[14]。该研究通过对宜宾地区艳山姜化学成分系统预试验和总黄酮含量测定发现，艳山姜叶片和果实中均含有总黄酮、多酚、鞣质、有机酸、甾体和三萜，叶片中可能含有生物碱、果实中不含生物碱，叶片和果实中均不含皂苷。大量研究表明，总黄酮具有明显的抗脂质过氧化[15]、清除羟自由基、调节血脂功能及抗过敏、抗炎、抗菌、抗突变、抗肿瘤、抗溃疡、抗病毒、保护心血管疾病和保肝等生理活性[7，16]，是一类极具开发前景的天然有机抗氧化剂。我国对艳山姜的利用主要是果实，其茎叶常被丢弃，若能将艳山姜及其丢弃叶片加以利用，进行艳山姜总黄酮的提取开发，制成艳山姜抗氧化剂或自由基清除剂，既能丰富市场又可提高艳山姜的综合利用，具有理想的社会意义和经济效益。通过该研究，探明了艳山姜总黄酮含量超过1%，具有开发利用价值，可进一步对艳山姜总黄酮在药用及食品工业中的应用展开研究。

参考文献

[1] 温远影，陈燕方，解雪梅.艳山姜中的新二萜化合物[J].植物学报，1997，39（10）：983-984.

[2] 沈祥春，胡涵帅，肖海涛.GC-MS法分析艳山姜根茎、茎、叶及果实等部位挥发油化学成分[J].药物分析杂志，2010，30（8）：1399-1403.

[3] 孙备.艳山姜水提物中具有生物活性的黄酮和麻醉椒吡喃酮化合物的分离[J].国外医学（中医中药分册），1999，21（5）：46-47.

[4] DE MOURA R S，EMILIANO A F，DE CARVALHO L C，et al.Antihypertensive and endothelium-dependent vasodilator effects of Alpinia zerumbet，a medical plant[J].J Cardiovasc Pharmacol，2005，46（3）：288-294.

[5] 吴万征，林焕泽，吴秀荣.艳山姜挥发油成分的气相质谱联用分析[J].中国医院药学杂志，2005，25（4）：332-333.

[6] 陶玲，沈祥春，彭佼，等.艳山姜全果及不同部位挥发油化学成分GC-MS分析[J].中成药，2009，31（6）：909-911.

[7] 李楠，刘元，侯滨滨.黄酮类化合物的功能特性[J].食品研究与开发，2005，26（6）：139-141.

[8] 孙玉婉，汪春牛，韩星，等.琼榄不同部位化学成分预试验及总黄酮含量测定[J].中国药房，2013，24（7）：618-621.

[9] ELZAAWELY A A，XUAN T D，KOYAMA H，et al.Antioxidant activity and contents of essential oil and phenolic compounds in flowers and seeds of Alpinia zerumbet（Pers.） B.L.Burtt.& R.M.Sm[J].Food Chem，2007，104（4）：1648-1653.

[10] CHOMPOO J，UPADHYAY A，GIMA S，et al.Antiatherogenic properties of acetone extract of Alpinia zerumbet seeds[J].Molecules，2012，17（6）：6237-6248.

[11] XU H X，DONG H，SIM K Y.Labdane diterpenes from Alpinia zerumbet[J].Phytochemistry，1996，42（1）：149-151.

[12] MPALANTINOS M A，SOARES DE MOURA R，PARENTE J P，et al.Biologically active flavonoids and kava pyrones from the aqueous extract of Alpinia zerumbet[J].Phytother Res，1998，12（6）：442-444.

[13] ELZAAWELY A A， XUAN T D，TAWATA S.Essential oils，kava pyrones and phenolic compounds from leaves and rhizomes of Alpinia zerumbet （Pers.） B.L.Burtt.& R.M.Sm.and their antioxidant activity [J].Food Chem，2007，103（2）：486-494.

[14] OBATA T，SAWABE A，MORITA M，et al.Several steroids and phenylpropanoid glycosides isolated from leaves of getto （Alpinia speciosa K.Schum.）[J].J Jpn Oil Chem Soc，1995，44（11）：1012-1014.

[15] BAHORUN T，LUXIMON-RAMMA A，CROZIER A，et al.Total phenol，flavonoid，proanthocyanidin and vitamin C levels and antioxidant activities of Mauritian vegetables[J].J Sci Food Agric，2004，84（12）：1553-1561.

[16] 王楠，劉战霞，程卫东.3种方法提取沙枣黄酮工艺的优化研究[J].安徽农业科学，2018，46（26）：150-155.