齐广涛，张丽丽，郭庆枝，王 莉，李 丽

近几年宫颈癌发病率居高不下，并呈年轻化趋势，患者复发率高，预后不佳。自噬与癌症进展相关，能诱导细胞凋亡，也能实现细胞器更新和代谢需求，进而保护细胞。腺苷酸活化蛋白激酶(adenosinemonophosphateactivatedproteinkinase，AMPK)激活可调节细胞增殖、凋亡、氧化应激，是细胞自噬途径的上游通路。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-死亡受体5(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand-deathreceptor5，TRAIL-DR5)是与自噬相关的跨膜受体，能上调DR5水平进而促进癌细胞凋亡。坎地沙坦是血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)受体拮抗剂，临床常用于降血压、改善心肌重塑，在肿瘤增殖、侵袭、血管生成方面也发挥重要作用，可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖，但作用机制未知。该研究测定经坎地沙坦作用后的HeLa细胞中自噬相关因子水平，以探究坎地沙坦调控HeLa细胞自噬保护作用相关机制。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

坎地沙坦购自上海阿拉丁试剂有限公司，货号：C129234-1 g；兔抗人TRAIL-DR5、兔抗人AMPK、兔抗人AMPK磷酸化(p-AMPK)、兔抗人自噬相关基因4A(autophagy related gene4A，ATG4A)、兔抗人微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3，LC3)、兔抗人Bax、兔抗人Bcl-2、兔抗人β-actin、兔抗人p62一抗均购自上海熹垣生物科技有限公司，货号分别为：XY-R30939、XY-70R-35353、XY-70R-7162、XY-SPC-626D-STR、XY-70R-21593、XY-70R-33866、XY-PSC-70-567-R050、XY-CVL-PAB72987、XY-F48757；羊抗兔IgG-HRP二抗购自上海恒斐生物科技有限公司，货号：SE134；Annexin V-FITC/PI试剂盒购自上海科敏生物科技有限公司，货号：KA3805；iBright FL1500智能成像系统、Attune NxT流式细胞仪购自美国赛飞世尔科技公司。

1.2 细胞

人宫颈癌细胞株HeLa购自中科院上海细胞库。5%CO、37 ℃、98%相对湿度的恒温培养箱中培养，培养液为含有10%FBS的DMEM培养基。隔天换液，0.25%胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。

1.3 CCK-8法测定坎地沙坦对HeLa细胞增殖的抑制作用