江 斓，钟 兴，潘天荣

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN) 是糖尿病常见的并发症之一，大部分患者会发展为晚期肾病。尽管目前临床采用抗高血压等方法治疗DN患者，但其治疗效果不佳。DN发病机制的中心环节为足细胞损伤。因此，预防或改善足细胞损伤对延缓DN的进展具有重要意义。

miRNAs是具有高度保守性的单链非编码小RNA。近年来研究显示miRNAs与DN关系密切。最新的研究报道，miR-483-5p与糖尿病有关。基于此，该研究采用棕榈酸(palmitic acid, PA)模拟高脂环境处理小鼠肾足细胞，探讨miR-483-5p在棕榈酸诱导损伤的足细胞中的作用及潜在机制，为明确DN的机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1

细胞株 小鼠肾足细胞购自ATCC。

1.1.2

主要试剂 PA(P0500，纯度≥99%)、小鼠重组干扰素-γ(407320)、0.25%胰蛋白酶(T4049)均购自美国Sigma公司；RMPI 1640培养基(31800)、CCK-8试剂(YZ-CK04)、RIPA buffer(P0013)、丙二醛(MDA；BC0025)、超氧化物歧化酶(SOD；BC0170)和BCA蛋白分析(PC0020)试剂盒均购自北京索莱宝生物科技有限公司；TRIzol(15596-026)、Lipofectamine3000(L3000015)、pcDNA3.1 vector(V79020)、pMIR-Report luciferase vector (AM5795)均购自美国Thermo Fisher Scientific公司；miR-483-5pinhibitor (miR20004782-1-5)、miRNA inhibitor阴性对照(iR2N0000001-1-5)、miR-483-5p mimic(miR10004782-1-5)、miRNA mimic阴性对照(miR1N0000001-1-5)均购自广州锐博生物技术有限公司；双荧光素酶报告测定系统(Promega，E1910) 购自北京普洛麦格生物技术有限公司；逆转录试剂盒PrimeScriptRT Master Mix(RR036A)、SYBR Premix Ex Taq II Kit(RR820A)均购自北京TaKaRa生物医学技术有限公司；12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE；P0012A)、PVDF膜(FFP28)、ECL kit(P0018FS)均购自上海碧云天生物技术有限公司；兔Cleaved Caspase-3 抗体(1/500，ab2302)、兔Nephrin抗体(1/1 000，ab216341)、鼠GAPDH抗体(1/500，ab8245)、山羊抗兔辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗(1/5 000，ab205718，)、山羊抗鼠辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二抗(1/5 000，ab205719)均购自上海艾博抗贸易有限公司；兔Podocin抗体(Santa，sc-22294)购自美国圣克鲁斯生物技术有限公司(Dallas, Texas)。

1.1.3

仪器 MultiskanFC 酶标仪购自美国Thermo Fisher Scientific公司；C1000 ThermalCycler转录仪购自美国BIO RAD公司；ABI7500实时荧光定量PCR仪购自美国Applied Biosystems公司；……