苏 丛,伍 婷,徐方明,陈昊然,刘艳艳,,4,律 娜,兰燕虎,4,李家斌,,,4

近些年，肺炎克雷伯菌(

klebsiella

pneumoniae

， Kp)的高致病性感染在世界范围内不断被报道，人类健康也因此受到严重威胁。当微生物侵入机体时，巨噬细胞首先对病原体发挥吞噬作用，此为固有免疫；而晚期核内体溶酶体适配器(late endosomal/lysosomal adaptor 2，Lamtor2)在吞噬的发生过程中发挥重要作用；Lamtor2也是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)以及哺乳动物雷帕霉素(mTOR)激活物/调节剂复合物2的靶点。巨噬细胞在抗感染免疫过程中，巨噬细胞的Lamtor2分子与细胞向M1分化及其对病原菌杀伤力密切相关。该实验通过构建、饲养、繁育和鉴定

Lamtor

2条件性基因敲除小鼠，获得

Lamtor

2/

Lyz

2-Cre鼠，建立

Lamtor

2巨噬细胞条件敲除小鼠感染Kp模型，为探究

Lamtor

2基因在抗Kp感染免疫过程中的机制提供线索。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1

实验动物

Lamtor

2/+小鼠共 3 只，雌鼠 1 只、雄鼠 2 只；

Lyz

2-Cre工具鼠共2只，雌、雄各1只，均购自赛业(广州)生物科技有限公司，20～30 g/6周龄，小鼠品系为C57BL/6J，无特殊病原体(SPF级)，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2018-0032，使用许可证号：SYXK(皖)2017-006；伦理审批号：LLSC20190253。实验过程遵循3R原则。

1.1.2

试剂与仪器 基因组DNA提取试剂盒(货号：JL45852)购自北京天根生化科技有限公司；Taq PCR Master Mix(货号：RR901)、TB Green Premix Ex Taq(货号：RR420)以及DL2 000 bp DNA marker(批号：A1A0438)均购自日本TaKaRa公司；琼脂糖粉(批号：111860)购自上海生工生物工程股份有限公司。β-Actin抗体(货号：sc-47778)购自美国Santa Cruz公司；iNOS抗体(货号：AF0199)购自美国Affinity公司；二抗山羊抗IgG/辣根酶标记[货号：ZB-2305(抗鼠)、ZB-2301(抗兔)]购自北京中杉金桥公司。

荧光定量PCR仪(罗氏LightCycler 96，瑞士)，基因扩增仪(Biometra Tone，德国)，Western blot电泳仪(Bio-Rad，美国)，凝胶电泳成像仪(Tanon 5 200 Multi，上海天能)。

1.2 实验方法

1.2.1

小鼠的饲养与繁殖 根据国家实验动物饲养和使用指南，将小鼠饲养于安徽医科大学SPF级动物房中，室温控制在20～25 ℃，湿度50%～60%，保证12 h光照，昼夜交替。……