苏苗赏，薛思忱，徐 莉，任锡凯，黄 楠，唐祝亲，徐漫欢

（1温州医科大学附属第二医院育英儿童医院、第二临床医学院，浙江温州 325027；2温州医科大学检验医学院、生命科学学院，浙江温州 325035）

临床流行病学调查显示，阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syn⁃drome，OSAHS）患儿夜遗尿发病率明显增高，尤其是女性OSAHS 患儿，夜遗尿发生率增高达4倍以上，严重影响患儿的身心健康［1-2］。既往研究已证实，间歇性低氧（intermittent hypoxia，IH）是OSAHS 的主要病理生理学机制，OSAHS 可导致全身多系统功能损害［3］。IH 可导致肾损害和夜间遗尿，前期的研究已经成功建立OSAHS 大鼠的遗尿模型［4］。儿茶酚雌激素在氧化应激作用下，通过膀胱神经受体信号转导，可诱发OSAHS 大鼠的遗尿反射［4］。中药益智仁（Al⁃piniae oxyphyllaeFructus，AOF）在OSAHS 大鼠的氧化应激反应中起重要调节作用［5］，但其作用机制尚不清楚。为进一步观察OSAHS 对逼尿肌细胞凋亡的影响及AOF 的调节机制，本研究通过建立模拟OSAHS 的逼尿肌细胞模型，观察IH 环境对人逼尿肌细胞凋亡及其钙离子通道的影响，探讨不同浓度AOF对逼尿肌细胞钙离子通道的调节机制。

材料和方法

1 主要试剂和仪器

特异性抗α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）单抗（bs-10169R，Bioss）和即用型DA⁃PI 染液（KGA215-50，江苏凯基生物技术股份有限公司）；Annexin V-FITC/PI Apoptosis Kit（AP101-100-kit，杭州联科生物技术股份有限公司）；P2X3受体拮抗剂（Proteintech）；β3受体拮抗剂（Abcam）；M3受体拮抗剂（Abcam）；益智仁提取物（AOF，澳门万生堂药材公司）；取不同剂量AOF 溶解于PBS 缓冲液，调节至干预浓度为10 mg/L、50 mg/L 和100 mg/L 备用。PBS 缓冲液：秤取NaCl 8.0 g，KCl 0.2 g，Na2HPO4·2H2O 2.85 g 和KH2PO40.24 g，加双蒸水900 mL 溶解，调pH 值至7.4，量筒定容至I L，高温高压灭菌后使用；0.5% Triton X-100：取50 μL Triton X-100 加入10 mL PBS 中，然后放入37℃水浴锅溶解。……