范安妮,佘之蕴,张 娟,周臣清,梁宇斌

(广东产品质量监督检验研究院,广东顺德 528300)

核酸扩增是分子生物学研究领域的一项重要技术,目前已广泛应用于医学诊断、食品检测、动植物检验检疫等行业中。核酸扩增技术分为变温扩增技术和恒温扩增技术两大类。传统的核酸扩增技术以变温扩增技术为主,包括常规PCR、梯度PCR、实时荧光定量PCR、巢式PCR、多重PCR等,扩增过程需循环经历变性、退火、延伸三个基本反应步骤,每个步骤的反应温度不一,因此扩增过程依赖专业仪器设备进行,同时由于反复调温,导致反应时间较长。随着分子生物学研究的不断深入,Notomi等[1]建立了一种新型的核酸扩增技术:环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。LAMP是利用能识别靶序列上的6个位点的4个特殊设计的引物和一种链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效、快速地在体外扩增核酸的新技术。与传统变温核酸扩增技术相比,LAMP仅需简单便宜的恒温器(水浴、金属浴、恒温箱等)即可完成反应,操作简单,反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断,也可通过荧光信号监测来判断,符合食品快速检测和现场检测的需要,在食品检测领域具有广阔的应用前景。本文重点介绍LAMP技术在食品微生物检测、转基因成分检测、过敏原成分检测和动物源性成分检测领域的应用研究进展,以期为食品快速、高通量检测技术建立提供参考。

1 环介导等温扩增技术在食品微生物检测领域的应用

食源性致病微生物一直是引发食品安全事故的主要因素[2],其产生的疾病严重危害公众健康,因此被列为食品卫生安全检测的重要指标[3]。……