陈彦彬

【摘要】 目的 分析miR-21在乳腺癌组织中的表达。方法 32例乳腺癌患者和32例乳腺良性病变患者， 均通过逆转录—多聚酶链式反应（RT-PCR）方法检测病变组织中的miR-21的表达情况， 分析miR-21与乳腺癌的关系。并使用转染的方法将miR-21转入MDA-MB231乳腺癌细胞中， 了解miR-21对MDA-MB231细胞迁移的作用。结果 乳腺癌组织中miR-21的相对表达量为（1.89±0.23）高于乳腺良性病变组织的（0.42±0.04）（P<0.05）；在对MDA-MB231细胞这一乳腺癌细胞系展开RNA转染时， 所用方法为Lipofectamine2000转染法， 确保转染率>90%；转染miR-21可以增加乳腺癌细胞系MDA-MB231的迁移能力（P<0.05）。结论 miR-21表达异常参与乳腺癌的发生及发展过程。

【关键词】 miR-21；乳腺癌；表达

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.29.021

microRNA（miRNA）是一类小的、内源性调节多种生物作用的非编码RNA， 可以参与基因转录后水平的调控， 调节细胞分化、增殖和死亡， 从而影响到生物体的生长、发育、衰老及死亡等生命过程。近年来有研究发现：在多种肿瘤细胞中， miRNA均出现异常表达， 且在肿瘤的形成、进展及耐药性中发挥重要作用， 以miR-21异常表达尤为显著[1]。目前， 关于miR-21在乳腺癌组织的表达变化， 在乳腺癌的发生及发展中的关系， 极少有文献报道。本次实验主要是研究miR-21在乳腺癌组织中的表达情况， 证实miR-21与乳腺癌的发生、发展及转移有密切的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2015年1月～2016年1月间本院收治的32例乳腺癌患者， 年龄16～58岁， 平均年龄（36.4±6.1）岁；32例乳腺良性病变患者， 包括18例纤维瘤和14例乳腺腺病， 年龄18～59岁， 平均年龄（36.7±6.9）岁。所有患者均为接受过放射疗法、化学疗法或免疫疗法， 进行手术后， 将患者切除的乳腺组织标本在10 min内存入液氮中。所有患者的诊断均经病理检查结果证实， 排除既往有肿瘤病史及其他部位转移的乳腺肿瘤。

1. 2 实验方法

1. 2. 1 细胞及试剂 生物资源中心ATCC提供的MDA-MB231细胞（人乳腺癌细胞系）， 使用的培养基为DMEM培养基（含各种氨基酸和葡萄糖的培养基、10%胎牛血清）， 放于培养箱（37℃恒温、5%CO2的饱和湿度）中培养， 当细胞生长融合度达90%以上后， 按照1∶3传代。转染试剂Lipofectamine2000及TRIzol、SYBR Green PCR试剂盒、miR-21、用Boyden小室进行侵袭实验。

1. 2. 2 实验方法 ①提取细胞的总RNA（荧光定量PCR Trizol法）， 并反转录成cDNA。将逆转录的cDNA放置于-20℃的冰箱中保存备用。采用2-△△Ct方法计数miR-21的表达量， 以内参基因U6作为标准， 采用Pfaffl法进行相对定量：△Ct tumor=Ct（待测基因）-Ct（内参基因U6）， △Ct normol=Ct（待测基因）-Ct（内参基因U6）， RQ=tumor/ normol（T/N）=2-△△Ct[2]。②细胞转染细胞接种24 h后， 当细胞生长至70%融合度时方能用于转染。在进行转染时依据其转染说明书进行操作， 时间为36 h， 而后可进行实验。③迁移能力运用伤口愈合实验对细胞的迁移能力进行分析。

1. 3 观察指标[3] 观察两组患者的miR-21的表达量、细胞转染效率及miR-21对乳腺癌细胞迁移的影响。

1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用 χ2 检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组患者的miR-21的表达量 乳腺良性病变组织中， miR-21的相对表达量为（0.42±0.04）；乳腺癌组织中， miR-21的相对表达量为（1.89±0.23）；两组间的miR-21的相对表达量比较差异有统计学意义（t=11.679， P=0.000<0.05）。

2. 2 细胞转染效率结果 在对MDA-MB231细胞这一乳腺癌细胞系展开RNA转染时， 所用方法为Lipofectamine2000转染法， 确保转染率>90%。

2. 3 miR-21对乳腺癌细胞迁移的影响 在经过24 h后， miR-21的伤口宽度为愈合前的10%， 无miR-21的伤口宽度为愈合前的50%， 伤口愈合结果显示：转染miR-21可以增加乳腺癌细胞系MDA-MB231的迁移能力（χ2=38.10， P=0.000<0.05）。

3 讨论

乳腺癌是以一种常见的恶性肿瘤， 近年来， 我国乳腺癌的发病率呈上升趋势。由于乳腺癌早期缺乏典型症状， 且缺乏乳腺保健意识， 以至于病情严重后才进行就医。乳腺癌是一种较为复杂的疾病， 其发生原因是由于多种基因异变造成的， 主要为癌基因及抑癌基因这两大类基因的变异。在进行乳腺癌的诊治中无法早期诊断， 且无法在治疗中防止肿瘤扩散及转移， 因此需研究乳腺癌的早期诊断标志物。

miRNA是一类约为22nt大小的非编码单链RNA分子。随着基因技术研究的不断深入， miRNA在肿瘤组织中表达异常已有大量的研究证实这一观点， 不同的肿瘤组织， 其异常表达方式不同， 在某些肿瘤组织中， miRNA的表达是下降的， 且还参与了肿瘤细胞的转移过程， 但也有一些肿瘤组织（脑胶质瘤及肺癌）中， miRNA在其组织中的表达是上升的， miR-21可以调节肺癌细胞的生长及迁移， 调节方式为：调节PTEN蛋白的表达；还可以调节脑胶质瘤的增殖能力， 调节方式为：STAT3信号通路[4]。近年来， 由于miRNA已形成广泛关注， 其参与肿瘤的转移的这一过程已经过很多学者的证实。

本次实验中， miR-21在乳腺癌组织中的表达要高于miR-21在乳腺良性病变组织的表达， 表明miR-21可能参与了乳腺癌的发生、发展过程；在对MDA-MB231细胞这一乳腺癌细胞系展开RNA转染时， 所用方法为Lipofectamine2000转染法， 确保转染率>90%；通过研究miR-21对乳腺癌细胞的影响， 表明转染miR-21可以增加乳腺癌细胞系MDA-MB231的迁移能力。miR-21在乳腺癌中的表达可以作为一种新型的疾病诊断、分类及预后的检查工具， 可以用于恶性肿瘤的诊断、治疗及判断预后。

综上所述， miR-21在乳腺癌中的表达是显著上升的， 且可以增加乳腺癌细胞的迁移能力， 初步表明， miR-21表达异常与乳腺癌的发生及发展过程具有密切的关系。

参考文献

[1] 卞国奉， 陈爱军. miR-21、miR-155在乳腺癌患者血液与肿瘤组织中表达水平的相关性研究. 海南医学， 2012， 23（18）：1-3.

[2] 刘奎. let-7a和miR-21在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞作用的研究. 江苏大学， 2015.

[3] 白建平， 卢建跃， 孙新增， 等. miR-21和miR-106a在乳腺癌组织中的表达及临床病理学意义. 宁夏医科大学学报， 2015， 37（5）：553-556.

[4] 刘文新， 李月峰， 朱小兰， 等. miR-21对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响. 江苏医药， 2014， 40（17）：1998-2001.

[收稿日期：2016-8-16]