曹华斌，涂　灵

(江西省妇幼保健院生殖健康科，南昌 330006)

维生素D受体基因多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究

曹华斌，涂灵

(江西省妇幼保健院生殖健康科，南昌 330006)

摘要：目的探讨维生素D受体(vitamin D receptor，VDR)基因FokI，BsmI，ApaI和TaqI的多态性与多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)的相关性。方法选择符合诊断标准的PCOS患者120例为研究组，对照组为同期的除外子宫内膜异位症的良性卵巢囊肿患者120例。对其一般指标及生化指标进行分析，同时分析2组患者的VDR基因的分布频率。结果与对照组相比，PCOS组患者BMI明显增高；2组总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)及空腹胰岛素(FSI)浓度均有明显的差异，HOMA指数PCOS组患者也要明显高于对照组(均P<0.05)。PCOS组患者等位基因b,a及基因型bb,aa的频率均明显高于对照组，等位基因T及基因型TT的频率也明显高于对照组(P<0.05)，但2组患者等位基因F及基因型FF差异则无统计学意义。结论VDR基因BsmI，ApaI和TaqI位点的多态性与PCOS的易感性密切相关，FokI位点的多态性与PCOS的易感性可能无关。

关键词：维生素D受体基因； 聚合酶链反应； 多态现象； 多囊卵巢综合征

polycysticovarysyndrome

多囊卵巢综合征(PCOS)是最常见的妇科内分泌疾病，具有不同程度的家族聚集及遗传现象，其主要症状是月经稀发或闭经、慢性无排卵、不孕、多毛及痤疮等。发病原因目前医学界认为主要与内分泌和代谢功能紊乱有关[1]。因持续无排卵，缺乏孕激素作用，子宫内膜在雌激素的长期作用下导致子宫内膜过度增生，增加子宫内膜癌的风险。最近有研究报道在PCOS患者中，血清25羟维生素D水平较高，与胰岛素抵抗呈负相关。以往有研究表明维生素D受体(VDR)基因多态性与胰岛素敏感性之间有显著的相关性[2-4]。在本研究中，笔者查阅相关文献后选择以下VDR基因：FokI，BsmI，ApaI和TaqI来研究其多态性，主要目的是探讨这些基因多态性与PCOS的相关性。

1对象与方法

1.1研究对象

选择 2010年10月至2014年10月于江西省妇幼保健院内分泌门诊或生殖健康科治疗的120 例PCOS患者为研究组。PCOS的诊断标准符合 2003年鹿特丹ESHRE/ASRM的标准[5]。对照组选择同期因良性卵巢囊肿(除外子宫内膜异位症)入院的患者120例。对照组患者均为月经正常的育龄期女性，近6个月未用激素及影响血压、血糖及垂体功能的任何药物，除外糖尿病，无肝肾功能损害。

1.2观察指标的测定

对于有月经者，在月经的第3天，而对于闭经者则在任一时间或于黄体酮撤药性出血的第3天空腹抽取外周静脉血。以上所有的标本均由一人用化学发光法测定其FSH、LH、PRL、T及E2值。同时测定所有研究组及对照组患者的血脂、血糖、胰岛素的浓度。

1.3VDR基因多态性分析

抽取外周静脉血后用2%EDTA抗凝，用Promega公司全血DNA抽提试剂盒，抽提基因组DNA。设计及合成引物如下：Taq酶位点上游引物5-CAGAGCATGGACAGGGAGCAA-3，下游引物 5-GCAACTCCTCATGGCTGAGGTCTC-3，BsmI酶位点上游引物5-GGGAGACGTAGCAAAAGG-3；下游引物 5-AGAGGTCAAGGGGTCACTG-3，FokI酶位点上游引物5-AGCTGGCCCTGGCACTGACTCTGCTCT-3，下游引物 5-ATGGAAACACCTTGCTTCTTCTCCCTC-3，ApaI酶位点上游引物5-CAACCAAGACTACAAGTACCGCGTCAGTGA-3，下游引物 5-TGGCGGCAGCCGATGTACGTCTGC-3。进行PCR反应： 取基因组DNA2μL，下游、上游引物各20pmol，KCL50mmol·L-1，Tris-HCL10mmol·L-1(pH=9) ，MgCL22.5mmol·L-1，dNTP各200μmol·L-1，TaqDNAPolymerase1.5U，反应总体系50μL。循环条件为94 ℃变性1min，58 ℃退火1min，72 ℃延伸1.5min，31个循环。取PCR扩增产物5μL，直接用5U酶切，37 ℃水浴保温2h后，产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，于凝胶图像分析系统下分析基因型。

1.4统计学方法

用Hardy-Weinberg遗传平衡检验研究组和对照组的基因多态性，并对等位基因的分布和基因型频率使用χ2检验。在不同的VDR基因型之间的参数采用方差分析(ANOVA)。所有的统计分析均采用SPSS15.0软件进行，以P<0.05作为有统计学意义。

2结果

1)2组病例一般指标及生化指标进行统计学检验结果，见表1。

由表1中可知，PCOS患者BMI明显高于对照组，而PCOS患者的总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)及空腹胰岛素(FSI)浓度与对照组比较也均有明显的差异，PCOS组患者HOMA指数也要明显高于对照组。

表1　2组患者的临床特征及生化指标　±s

2)2组患者VDR基因的分布频率见表2。由表2可知，2组研究对象VDR基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。但VDR基因BsmI、ApaI和TaqI酶切位点各基因型在PCOS组和对照组的分布差异具有统计学意义(均P<0.05),其中PCOS组患者等位基因b,a及基因型bb,aa的频率均明显高于对照组，而等位基因T及基因型TT的频率则PCOS组明显高于对照组患者，但2组患者等位基因F及基因型FF差异则无统计学意义(P>0.05)。

表2　2组患者VDR基因的分布频率

3讨论

人类维生素D受体(VDR) 基因位于12q13,由9个外显子和8个内含子组成[6],存在多个限制性内切酶酶切位点，其中常见的是BsmI,ApaI,TaqI和FokI4种,依次位于第8内含子,第9外显子和转录起始位点。一般用b,at,f表示存在这4种内切酶的多态位点,用B,A,T,F表示缺乏这4种内切酶的多态性位点[7]。近年来关于维生素D受体基因与糖尿病[8]、骨质疏松症[9]等疾病之间关系的研究已经取得一定进展。据查阅国内的相关文献所知，本研究是首次在国内探讨VDR基因多态性与PCOS及其胰岛素抵抗相关性的研究。

本研究发现PCOS患者的BMI明显高于对照组，而且存在有不同程度的脂类代谢紊乱。这可能本身与其发病原因如内分泌和代谢功能紊乱有关，而内分泌和代谢功能紊乱又加重PCOS的临床表现。 从基因层次上来说可能是VDR基因的翻译和表达有着微妙的调节，基因转录后使mRNA的质量和稳定性受到一定的影响，产生VDR蛋白数目或活力上的轻微差异，最终产生一系列的效应。有研究表明VDR基因多态性影响β细胞的分泌功能，VDR变异可能通过影响β细胞的分化而改变胰岛素的应答，从而引起胰岛素分泌受损，引起代谢功能紊乱。还有研究报道，VDR受体基因还可以影响脂肪细胞的代谢和分化，加之其影响胰岛素分泌的作用可能与肥胖易感性有关[10-11]。

通过本研究发现，某些VDR基因型和单纯型等位基因可能与PCOS的发病存在一定的相关性。本研究PCOS组患者等位基因b,a及基因型bb,aa的频率均明显高于对照组，等位基因T及基因型TT的频率明显高于对照组，但2组患者等位基因F及基因型FF则无显著性差异。这可能表明BsmI,ApaI,TaqI位点的多态性与PCOS的易感性有关。与2009年MahmoudiT，2013年AmalS等[12-13]的研究不一致，差异存在的原因可能是种族差异的不同。本研究人群均为中国汉族人群，而以上两位学者研究的人群均为欧洲人种，在不同的种族群体中，等位基因频率的差别很可能是进化进程和人群遗传学行为的结果。此外可能存在的解释还有生活环境的迥异，饮食习惯的不同，体内维生素D水平的不同，日照时间的长短等因素。PCOS作为多基因疾病，由多个微效基因作用，每个微效基因的表型效应很小，表现型是遗传基因与环境相互作用的结果，需要结合环境因素综合分析。

总之，VDR基因型调节PCOS发生的具体机制还不太清楚，但是认识到VDR基因多态性与疾病的发生之间存在关系，为在基因水平认识PCOS的发病机制提供了一个很好的线索。VDR基因多态性通过影响胰岛素的敏感性而影响代谢紊乱的发生，为从基因水平认识PCOS的发病机制提供了一个新思路。

参考文献：

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(责任编辑：刘大仁)

AssociationbetweenVitaminDReceptorGenePolymorphismandPolycysticOvarySyndrome

CAOHua-bin,TULing

(Department of Reproductive Health,Jiangxi Maternal and Child Health Hospital,Nanchang 330006,China)

ABSTRACT：ObjectiveTo investigate the relationship between vitamin D receptor(VDR) gene BsmI,FokI,ApaI and TaqI polymorphisms and polycystic ovary syndrome(PCOS).MethodsThe general conditions,biochemical indexes and VDR gene distribution frequencies were analyzed in 120 patients with PCOS(study group) and 120 benign ovarian cyst patients without endometriosis(control group).ResultsCompared with control group,body mass index,homeostasis model assessment index,and frequencies of b,a and T alleles and bb,aa and TT genotypes significantly increased in study group(all P<0.05).Furthermore,the differences in total cholesterol,triglyceride,low density lipoprotein,high density lipoprotein and fasting insulin levels were significant between the two groups.There were no significant differences in frequencies of allele F and genotype FF between the two groups.ConclusionThe susceptibility of PCOS is closely related to VDR gene BsmI,ApaI and TaqI polymorphisms,but not associated with FokI polymorphism.

KEY WORDS：vitamin D receptor gene; polymerase chain reaction; polymorphism;

收稿日期：2015-10-20

基金项目：江西省科技厅社会发展科技支撑计划(2010BSB00404)

作者简介：曹华斌(1975—)，男，硕士，主任医师，主要从事妇科的临床研究。

中图分类号：R711.75

文献标志码：A

文章编号：1009-8194(2016)02-0040-03

DOI:10.13764/j.cnki.lcsy.2016.02.017