董 妍,胡文忠,何煜波,姜爱丽,冯 可,李晓博

(1.大连工业大学食品学院,辽宁大连 116600;2.大连民族学院生命科学学院,辽宁大连 116600;3.大连理工大学生命科学与技术学院,辽宁大连 116024)

多重PCR快速检测两种致泻性大肠杆菌方法的建立

董 妍1,胡文忠2，*,何煜波2,姜爱丽2,冯 可3,李晓博2

(1.大连工业大学食品学院,辽宁大连 116600;2.大连民族学院生命科学学院,辽宁大连 116600;3.大连理工大学生命科学与技术学院,辽宁大连 116024)

本研究以肠出血性大肠杆菌O157∶H7及肠侵袭性大肠杆菌为目标菌,针对大肠杆菌共同基因uidA、肠出血性大肠杆菌O157∶H7的特异基因O-antigen、肠侵袭性大肠杆菌的特异基因ipaH设计3对引物,建立并优化了检测两种菌的多重PCR检测方法,进行了特异性验证和灵敏度分析,并应用于人工接种新鲜莴苣的检测中。实验结果表明,本研究建立的三重PCR快速检测两种致病菌的检出限为6.3×103CFU/mL,具有较好的灵敏度和特异性。利用所建立的多重PCR方法对人工接种肠出血性大肠杆菌O157∶H7和肠侵袭性大肠杆菌的新鲜莴苣进行检测,检出限为7.8×104CFU/mL。此方法能够对肠出血性大肠杆菌O157∶H7和肠侵袭性大肠杆菌两种食源性致病菌进行快速检测。

多重PCR,快速检测,肠出血性大肠杆菌O157∶H7,肠侵袭性大肠杆菌

表1 多重PCR引物序列

大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)作为人和动物肠道内的优势菌,大部分不具有致病性,但是少部分血清型的大肠杆菌可以引起人体以腹泻症状为主的疾病,严重者可危及生命。根据不同血清型的致泻大肠杆菌的生物学特性,国际……