孙　瑞，刘　珺，沈玉君，沙曼琪，徐胜春，沈玉先

(安徽医科大学1.基础医学院、2.生物药物研究所，安徽合肥　230032;3.解放军第306医院心血管内科，北京　100010)



中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子对糖氧剥夺/再灌注诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

孙瑞1，2，3，刘珺1，2，沈玉君1，2，沙曼琪1，2，徐胜春1，沈玉先1，2

(安徽医科大学1.基础医学院、2.生物药物研究所，安徽合肥230032;3.解放军第306医院心血管内科，北京100010)

摘要:目的研究中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor，MANF)对糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion，OGD/R)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞，对细胞进行糖氧剥夺(OGD) 6 h，再灌注(R) 12 h。在再灌注时期，根据是否给予重组人MANF蛋白处理(2 μmol·L(－1)，12 h)，将细胞分为正常对照组(NC)、NC+ MANF组、OGD/R组和OGD/R+ MANF组。随后光学显微镜下观察SH-SY5Y细胞形态的改变，MTT法检测细胞存活率，PI染色法检测细胞死亡率，免疫印迹法检测内源性MANF蛋白、内质网(ER)应激相关蛋白GRP78/BiP、p-IRE1、p-eIF2α及促凋亡蛋白cleaved caspase-3和CHOP的表达。结果光学显微镜下可见OGD/R组SH-SY5Y细胞胞体变小、变圆，突起缩短或消失。进一步研究发现，MANF能明显改善OGD/R诱导的SHSY5Y细胞存活率下降和死亡率增加。免疫印迹法检测发现: OGD/R组细胞内源性MANF蛋白表达增高; ER应激相关蛋白GRP78/BiP、p-IRE1、p-eIF2α表达增高;促凋亡蛋白CHOP及cleaved caspase-3的表达明显高于NC组。给予重组人MANF蛋白可降低OGD/R组GRP78/BiP、CHOP及cleaved caspase-3的表达水平。结论OGD/R可诱导凋亡性ER应激; MANF蛋白可通过抑制OGD/R诱导的凋亡性ER应激而对SH-SY5Y细胞具有保护作用。

关键词:糖氧剥夺/再灌注;内质网应激;凋亡; MANF;非折叠蛋白反应;神经保护

组织器官在缺血后进行血液再灌注时可能导致缺血/再灌注损伤的发生。……