周志米张晓燕

(1.台州市博爱医院,浙江 台州 318050;2.台州曙光医院,浙江 台州 318050)

自制梅毒、丙肝、艾滋病抗体复合质控品的稳定性评价

周志米1张晓燕2

(1.台州市博爱医院,浙江 台州 318050;2.台州曙光医院,浙江 台州 318050)

目的评价自制多项目复合免疫定性分析(包含梅毒螺旋体抗体,丙型肝炎病毒抗体,艾滋病病毒抗体)质控品的稳定性。方法 用阳性对照稀释法制备的复合质控品在-20℃以下保存及复溶后2～8℃保存的稳定性进行评价。结果自制质控品-20℃以下保存稳定至少6个月以上,但因复溶后稳定性不佳应分小瓶一日用量分装。结论 自制复合免疫定性质控品-20℃以下保存稳定性较好,分小瓶分装复溶后当天使用稳定性良好,基本能满足基层实验室室内质控的要求。

免疫定性分析 自制质控品 稳定性

随着酶标仪在基层实验室的普及,以往用肉眼和经验判断的纯定性试验逐渐被用酶标仪根据cut off值判定结果的数值化定性试验所取代。在临床实验室中质控品是保证室内质量工作的重要物质基础[1],而目前国内临床实验室免疫定性分析的质控品主要来自国外进口,存在单一项目且价格昂贵,让中小型医院的实验室望而却步,在基层实验室推广困难等诸多问题。鉴于上述情况,作者结合近几年的工作实践自制了一种以正常人血清为基质,包含梅毒螺旋体抗体(TP)、丙型肝炎病毒抗体(HCV)、艾滋病病毒抗体(HIV)三类标志物的复合质控品。现对其稳定性进行初步评价。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂 ST-360酶标仪和ST-36W洗板机(上海科华实验室系统有限公司);人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒(上海荣盛生物药业有限公司);梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(英科新创科技有限公司);丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(英科新创科技有限公司)。

1.2 质控品的制备

1.2.1 血清基质的制备 收集正常人血清(所有肝炎标志物及HIV均阴性且无溶血或脂血)一定量,混匀后以3500～4500g/min离心5分钟,过滤除去残留的纤维蛋白和血细胞成份,56℃加热30分钟灭活后制得质控品血清基质。

1.2.2 稀释度的确定 用上述血清对HIV阳性对照(HIV-Ⅰ型和HIV-Ⅱ型阳性对照等量混合)做5～100倍系列稀释,测定HIV抗体的滴度和各稀释度的质控物吸光度值,每稀释度平行做3孔,取其平均值。按照HIV抗体弱阳性(S/CO=2.0～2.9)的标准,确定外部质控血清的稀释度。HCV和TP稀释度的确定方法同上。

1.2.3 根据确定的稀释度用制备的血清稀释阳性对照至目标浓度(S/CO=2.0～2.9)的复合质控品。将质控血清用0.2μm滤膜过滤除菌,按5天试验用量分装、标记、封口,-20℃以下保存。

1.3 方法

1.3.1 三种抗体的检测方法采用酶联免疫吸附试验,按各自的操作SOP文件进行操作。

1.3.2 -20℃保存稳定性试验 将制备的质控品在-20℃冰箱分别保存1、6、12个月后再进行三种抗体检测,质控品复溶后限当天使用,每份标本测定3次取平均值,结果用吸光度(OD)值表示,并计算求得每组数据的变异系数(CV)值,见表1。

1.3.3 每份质控品复溶后2～8℃保存连续使用5天,每天随标本检测1次,并以5天为周期,连续监测20个周期,得到各项目在不同使用天数时的均值和变异系数(CV)值,见表2。

表1 自制复合质控品第1、6、12个月结果比较(n=20)

表2 自制复合质控品复溶后第1、2、3、4、5天结果比较(n=20)

1.4 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件包处理数据,进行配对t检验和两组独立样本的t检验。

2 结 果

2.1 -20℃保存第1、6、12个月后检测结果无显著性差异(P＞0.05)。

2.2 自制质控品复溶后2～8℃保存第1天与第2、3天比较无显著性差异(P＞0.05),与第4、5天比较有显著性差异(P＜0.05)。

3 讨 论

3.1 自制外部质控的基质应尽量选择人血清基质,动物源性的基质由于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起非特异或中和反应造成假失控,所以应避免使用动物源性的小牛血清,最好也不用生理盐水或其他缓冲液稀释,以保证蛋白质处于天然的浓度和状态,不加任何防腐剂,同时制备足够的量以维持一定的时间,建议每年制备1次。

3.2 自制质控品能用于艾滋病酶联免疫室内质控[2]。实验证明自制质控品同样适用于丙肝抗体和梅毒螺旋体抗体酶联免疫室内质控。自制质控血清与试剂是一个批号包装,为一个检测系统,基

质效应最小,可将质控与阳性合为一孔,因为阳性对照只用作指示反应,稀释后的阳性质控品结果阳性,其原阳性对照肯定是阳性,同样可起指示反应作用,从而节省资源。

3.3 自制质控血清稳定性观察,第1、6、12个月检测的(¯x±s),CV比较无显著性差异(P＞0.05)。说明自制复合质控品冷冻保存稳定,免疫质控的稳定性要求瓶间变异小于20%,而作者比较各月的变异在12%～17%之间,表示该质控品处于良好稳定状态。

3.4 质控品复溶后三天内稳定,这与鲍作义等[3]关于HIV抗体质控品稳定性的报道结果相符,但从试验结果可见,第2、3天的CV较第1天要偏大,所以作者认为自制质控品最好是分小瓶1天用量分装为佳。

[1] 王治国,李小鹏.临床检验定量测定室内质控系统的建立.检验医学,2004,19(1):6

[2] 张桂芳.HIV病抗体外部质控血清的制备及评估.现代检验医学杂志,2008,23(1):110

[3] 鲍作义,李敬云,刘思扬.HIV抗体抗质控血清稳定性研究.中国艾滋病性病,2002,8(3):137