张红发，任 婧，刘 景，游春苹，顾瑾麟

（1.光明乳业股份有限公司技术中心，乳业生物技术国家重点实验室，上海 200436；2.江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122）

酸奶中长双歧杆菌PCR计数方法的建立

张红发1，2，任 婧1，刘 景1，游春苹1，顾瑾麟1

（1.光明乳业股份有限公司技术中心，乳业生物技术国家重点实验室，上海 200436；2.江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122）

根据细菌保守序列设计一对通用引物，扩增细菌16S rDNA序列，作为阳性标记；根据长双歧杆菌菌株的16S rRNA和23S rRNA之间的间区基因序列设计定性PCR引物。用BBL琼脂平板对长双歧杆菌混合发酵的酸奶进行培养计数，随机挑选部分长出的菌落，提取DNA做PCR鉴定。将PCR技术与传统平板计数技术结合起来，初步建立酸奶中长双歧杆活菌计数方法。抽提方法操作简便、高效、灵敏，决定着PCR计数方法的准确高效，本研究着重研究了菌体DNA抽提方法的影响因素，以及抽提方法通用性，同时也研究了PCR引物的特异性。将PCR技术与传统平板计数技术结合起来，初步建立酸奶中长双歧杆活菌计数方法。

PCR，计数，长双歧杆菌

双歧杆菌为存在人类肠道中益生菌，近年来国内外含双歧杆菌活菌混和制剂日益增多特别是含双歧杆菌和乳酸菌混合发酵的奶类制品[1]。产品中活菌数决定着产品质量，准确、快速的双歧杆菌活菌计数方法越来越重要。而GB/T4789-34-2008《食品卫生微生物学检验双歧杆菌检验》中对双歧杆菌采用生化反应和酶活测定鉴定，操作复杂，周期长，费用高，实际操作困难。……