朱德育 朱义彬 翟明礼 武培 苏瑜

提高EP-SPM产品质量的工艺研究

朱德育 朱义彬 翟明礼 武培 苏瑜

目的 降低有关物质含量;方法 改进提取精制工艺;结果 优化了提取精制工艺;结论

改进后的提取精制工艺可以降低有关物质的含量，使产品能够100%符合欧洲药典2001版质量标准［2001：0293］。

提取;精制;有关物质;欧洲药典

螺旋霉素(Spiramycin简称SP)是十六元环大环内酯类抗生素，于1954年Phone-Poulenc实验室从Streptmyces ambofaciens代谢产物中分离获得。螺旋霉素属中谱抗生素，它不可逆地抑制了核糖体上肽键的形成，主要对葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌等革兰氏阳性菌及脑膜炎双球菌等革兰氏阴性菌有高度敏感性。它对耐青霉素的致病菌具有较好的疗效。在现代生活中有广泛的用途，国内还用于急性乳腺炎、急性淋巴炎等，都具有很好的疗效［1，2］。

我公司研制的螺旋霉素经中国科学院微生物研究所鉴定为(Streptomyces ambofaciens)与Spiramycin的产生菌为同一菌种。研制的原料药经组分确证与欧洲药典委员会提供的Spiramycin标准品相符，因此我们将该品命名为：EP-SPM。

1 材料与方法

1.1 菌种

生二素链霉菌(Streptomyces ambofaciens)F809-21天方药业股份有限公司提供。

1.2 含量及有关物质的测定方法：按欧洲药典［2001：0293］有关物质检测法检测

2 结果与讨论

2.1 EP-SPM 有关物质的确定

分别称取标准品与样品25 mg，按欧洲药典［2001：0293］有关物质检测法检测，得高效液相色谱图2.1：从色谱图可以看出，样品中主要超标的前杂质峰与标准图谱中第一个杂质一致，即前杂质应为NSPMⅠ(NewspiramycinⅠ)，与SPMⅠ在结构上少了一个碳霉糖，分子量为693。后杂质与标准图谱中DSPM(Dimer Spiramycin)一致，即螺旋霉素的二聚物，其分子量为SPM的二倍。

图1 标准品与样品高效液相色谱图有关物质对照

2.2 EP-SPM有关物质特性

EP-SPM 为弱碱性生化物质，在水溶液中呈二级电离pK1=7.1，pK2=8.4，共有SPM、SPM+、SPM2+三种存在状态。

对于碱性生化物质：

pH＞pK 物质呈游离分子状态 易从水相→有机相

pH＜pK 物质呈“+”离子状态 易从有机相→水相

由EP-SPM HPLC图谱分析可见：

极性大小：前杂质＞EP-SPM＞后杂质;碱性强弱：前杂质＞EP-SPM＞后杂质，所以，pK前杂质＞pKEPSPM＞pK后杂质。

2.3 去除有关物质的工艺改进

2.3.1 去除前有关物质的工艺研究 洗前杂质峰适宜的pH条件应尽量满足使前有关物质最大程度进入水相，而主要组分尽可能多地留在有机相，所以pK前杂质＞pH ＞pKEPSPM。

当温度在20～22℃范围内，下相洗涤液pH一般在7.0时，即pK1左右，能较好满足上述要求。如果pH降低，会使主要组分大量进入水相，收率降低;pH升高，前杂质不易进入水相，导致前有关物质不合格。

温度升高，主要组分和有关物质在水相溶解度均降低，上述的洗涤条件不能使前有关物质充分进入水相，前有关物质会不合格。如果将pH调低，可以使前有关物质合格，但当pH＜pKEPSPM，也会使主要组分大量转入水相，洗涤损失率增大，所以洗涤温度应控制在25℃以下。

因此，适宜的缓冲液洗涤条件为：0.01M pH 2.5-3.0缓冲液，下相pH 7.0-7.4，温度为20℃ ～25℃。

2.3.2 去除后有关物质的工艺研究 反萃的pH条件应满足使主要组分大量进入水相，而后有关物质尽可能保留在有机相，所以pKEPSPM ＞pH＞pK后杂质。

当温度在20℃ ～25℃时，反萃pH控制在5.5能较好满足上述条件，使后杂质合格。如果pH降低，会使主要组分更多地进入水相，收率提高，但pH就可能小于pK后杂质，使后有关物质呈离子状态，而大量进入反萃液，导致不合格。原工艺中反萃pH3.5是造成后杂质不合格的主要因素。

如果温度升高，由于溶解度下降，总收率会降低，后有关物质也会降低，为了提高收率而将pH降低，有可能会使pH＜pK后杂质，使后杂质大量进入水相，导致后有关物质不合格。适宜的反萃条件为pH 5.5，温度20℃ ～25℃。洗涤：缓冲液pH 2.5-3.0洗涤pH 7.0-7.4温度25℃以下。反萃取：缓冲液pH 2.0温度20℃ ～25℃下相平衡pH 5.5。结果见表1。

3 结论

洗涤：缓冲液pH 2.5-3.0，洗涤pH 7.0-7.4温度25℃以下。反萃取：缓冲液pH 2.0温度20℃ ～25℃下相平衡pH 5.5按此工艺洗涤和反萃取，前、后有关物质均符合欧洲药典质量标准。温度提高(大于25℃)在相同的反萃pH条件下，收率降低，但可适当降低反萃取pH来保证收率的提高，平均收率65%。

［1］朱峰，王尔康.螺旋霉素的在评价.中国抗生素杂志，1991，16(3)：231-236.

［2］陈长华，肇玉鹏.螺旋霉素培养基的改进.中国抗生素杂志，1994，19(4)：271-274.

463000 河南驻马店天方药业股份有限公司

表1 生产实验EP-SPM的收率与质量

批号 洗涤 反萃取℃pH ℃ pH 收率% 总收率% 前有关物质 后有关物质%030940030 20 7.0 22 5.4 76.24 65.33 0.9 1.4 030940040 20 7.0 22 5.3 77.64 64.20 0.9 0.8 030940050 20 7.1 20 5.5 78.94 68.05 1.3 1.5 030940060 24 7.5 20 5.2 77.19 66.12 1.2 1.3 030940070 24 7.4 20 5.2 78.68 65.56 1.0 1.3 030104090 20 7.4 20 5.4 77.97 64.69 1.0 1.0 031040100 21 7.4 20 5.4 74.00 65.10 1.0 1.0 031040110 20 7.4 20 5.5 78.79 62.41 1.7 1.0