李俊运　李丽

摘 要：本研究旨在建立一种变波长高效液相色谱法同时测定糕点中5种食品添加剂的快速检测方法。最终确定分离条件为博纳艾杰尔Venusil XBP Perservatives色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇和20 mmol·L-1磷酸二氢铵（pH值调至5.5）进行梯度洗脱，DAD紫外检测器（190～400 nm）进行变波长监测，外标法进行定量分析。结果表明，5种食品添加剂的回收率为95.44%～96.96%，精密度为0.10%～0.20%。

关键词：食品添加剂；糕点；变波长；高效液相色谱法

Determination of Food Additives in Pastry by Variable Wavelength High Performance Liquid Chromatography

LI Junyun1，2， LI Li1*

（1.College of Bioengineering， Sichuan University of Science & Engineering， Yibin 644005， China; 2.Yibin Food and Drug Inspection and Testing Center， Yibin 644600， China）

Abstract： This study aims to establish a rapid detection method for five food additives in pastries using variable wavelength high-performance liquid chromatography. The final separation condition was determined to be the Bonna-Agelas Venusil XBP Preservatives column （4.6 mm×250 mm， 5 μm）， The mobile phase consists of methanol and 20 mmol·L-1 ammonium dihydrogen phosphate （pH value adjusted to 5.5） for gradient elution. The DAD ultraviolet detector （190～400 nm） is used for wavelength monitoring， and the external standard method is used for quantitative analysis. The result showed that recovery rate range of five food additives is 95.44%～96.96%， the precision range is 0.10%～0.20%.

Keywords： food additives; pastries; variable wavelength; high-performance liquid chromatography

糕点是日常生活中常见的食品，深受各个年龄段消费者的喜爱，其质量和安全都至关重要。为了延长糕点的保质期，提升糕点的口感，糕点在生产加工过程中一般会加入不同种类的防腐剂和甜味剂[1]。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）对不同种类的食品添加剂以及其所对应的限量值进行了严格的规定[2]。但是一些不法商家为了获得利益，会在糕点生产加工过程中非法添加或者过量添加食品添加剂，对人体的健康造成潜在的威胁。因此，市场监督管理部门需要进一步加强对食品添加剂的监管。

目前，只能按照相应的国家标准对食品中的单一添加剂进行前处理和样品分析，耗时较长、流程较为烦琐、消耗耗材较多[3-4]，因此建立同时检测多种食品添加剂的方法非常有必要。本文建立了一种能够同时检测食品中多种防腐剂以及多种甜味剂混合使用的简便方法，在降低检验检测成本的同时，还能提升市场监督管理部门在食品安全监管工作中的效率以及准确性。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

样品：周边超市采购（主要是购买预包装的糕点）和日常检验检测样品（包括各种省级和市县级的监督抽检任务和委托检验任务），实验样本均为不重样糕点。

试剂：甲醇（色谱纯，山东禹王和天下新材料有限公司）；亚铁氰化钾（分析纯，西陇科学股份有限公司）；乙酸锌（分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；磷酸二氢铵（分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；氨水（分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；氢氧化钠（分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；磷酸（分析纯，成都市科隆化学品有限公司）。

标准品：苯甲酸、山梨酸、糖精钠（3种标准品均购买于中国计量科学研究院，浓度均为1 000 μg·mL-1，5 mL）；脱氢乙酸（纯度99.9%，100 mg，北京坛墨质检科技有限公司）；安赛蜜（浓度为1 000 μg·mL-1，5 mL，北京坛墨质检科技有限公司）。

1.2 仪器与设备

Agilent 1260高效液相色谱仪（配备紫外检测器），美国安捷伦；XW-80A涡旋混合仪，上海青浦沪西仪器厂；超级纯水机，南京易普易达科技发展有限公司；TG-16高速离心机，四川蜀科仪器有限公司；超声波清洗机，鼎泰生化科技设备制造有限公司；电子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；0.22 μm水系滤膜，天津市津腾实验设备有限公司；pH计，上海仪电科学仪器股份有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 溶液配制

①氢氧化钠溶液（20 g·L-1）。称取20 g固体氢氧化钠于1 L容量瓶中，用900 mL超纯水超声溶解后，最终用超纯水定容至刻度，摇匀即得。②亚铁氰化钾溶液（92 g·L-1）。稱取106 g固体亚铁氰化钾于

1 L容量瓶中，先加入800 mL超纯水超声溶解，最终用超纯水定容至刻度，摇匀即得。③乙酸锌溶液（183 g·L-1）。称取220 g乙酸锌于1 L容量瓶中，先加入一定量超纯水溶解，再加入冰醋酸30 mL，最终用超纯水定容至刻度，摇匀即得。④20 mmol·L-1磷酸二氢铵溶液（pH值调至5.5）。称取2.3 g磷酸二氢铵于1 L容量瓶中，用990 mL水溶解，用氨水调节溶液pH值到5.5后，最后用超纯水定容至刻度，摇匀并过0.22 μm水系滤膜即得。

称取脱氢乙酸标准品10.01 mg于10 mL棕色容量瓶中，用1 mL上述配制的氢氧化钠溶液（20 g·L-1）溶解脱氢乙酸标准品，再用水定容至刻度，混匀，配成浓度为1 000 μg·mL-1的脱氢乙酸标准储备液。准确吸取其他4种标准品原液1 mL和脱氢乙酸标准储备液1 mL于同一10 mL容量瓶中，超纯水定容至刻度，混匀，得到浓度为100 μg·mL-1的5种食品添加剂混合标准储备液。再用水进行逐级稀释，分别得到浓度为5 μg·mL-1、10 μg·mL-1、20 μg·mL-1、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1的5种食品添加剂混合标准工作曲线。

1.3.2 试样前处理

称取2 g粉碎混匀后的糕点试样（精确至0.01 g），置于50 mL离心管中，加入20 mL超纯水进行提取，于涡旋混合仪上涡旋10 min后，在50 ℃下进行超声处理20 min。再准确加入3 mL乙酸锌溶液和3 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，在6 000 r·min-1下进行10 min离心，将上清液转移至锥形瓶中[5]。剩余残渣再次使用前处理方式提取所需组分，将两次的提取液合并至同一支50 mL比色管，超纯水定容至刻度并摇匀。再取摇匀后试样过0.22 μm水系滤膜进入高效液相色谱仪待测。

1.3.3 色谱条件

色谱柱：博纳艾杰尔Venusil XBP Perservatives色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：A为甲醇、B为20 mmol·L-1磷酸二氢铵溶液（pH=5.5）；进样量：10 μL；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；检测器：DAD紫外检测器。波长变化检测见表1，梯度洗脱程序见表2。

2 结果与分析

2.1 标准曲线绘制

按照1.3.3的色谱条件，以多种食品添加剂混合标准工作溶液的浓度作为横坐标，以每种添加剂对应的峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线，每种食品添加剂对应的回归方程以及相关系数见表3。5种食品添加剂出峰顺序见图1。

2.2 检出限

将5种添加剂的混合标准溶液加入空白基质的样品中，在相同的实验条件下进行6次重复的测定，再按照3倍信噪比得到每种添加剂对应的检出限，结果见表4。

2.3 添加回收率以及精密度

按照国家标准，糕点样品中不可能同时含有本次研究的5种添加剂，因此采取加标回收率的方式进行回收率和精密度的确定和验证[6]。向空白糕点样品中添加5种添加剂标准溶液，按前处理的方式同试样一起处理，重复测定6次，得到表5的回收率和精密度结果，5种食品添加剂的回收率为95.44%～96.96%，精密度为0.10%～0.20%。

2.4 试样分析

采用本方法对市面上流通的10份糕点进行5种添加剂的含量检测，其中有1份糕点样品中检出山梨酸含量为0.125 g·kg-1，其余添加剂均未检出，且检出有山梨酸的糕点样品對应的含量均处于《国家食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》规定的要求范围内，消费者可以放心食用。

3 结论

采用变波长高效液相色谱法进行梯度洗脱的方式对糕点中多种食品添加剂进行同时监测，前处理过程操作简单，回收率为95.44%～96.96%，精密度为0.10%～0.20%，可见本方法适用于糕点食品添加剂日常的检验检测和分析。

参考文献

[1]孙裴键.食品添加剂对食品安全的影响分析[J].现代食品，2023，29（20）：157-159.

[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准：GB 2760—2014[S].北京：中国标准出版社，2014.

[3]王珍妮，宋月，赵叙，等.超高效液相色谱法检测酸菜中山梨酸和苯甲酸[J/OL].微量元素与健康研究，1-2

[2023-11-13].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/52.1081.R.20231103.1616.008.html.

[4]王然然，王楠楠，苗育可，等.高效液相色谱法同时测定食品中8种食品添加剂[J].现代食品，2021，27（5）：

148-150.

[5]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定：GB 5009.28—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[6]刘星，杨黎，冯婷，等.高效液相色谱法检测4种食品中11种食品添加剂[J].食品安全质量检测学报，2021，12（10）：4188-4194.

作者简介：李俊运（1995—），男，四川内江人，硕士在读，助理工程师。研究方向：食品药品检验检测。

通信作者：李丽（1982—），女，辽宁朝阳人，博士，副教授。研究方向：乳制品及食品生物化学。E-mail： kokonice@139.com。