江文康 黄国健 雷彬 王彩莹 罗惠娜 赵明明 樊全宝 阮慧敏 陈胜锋 王丙云

摘要：【目的】建立马脐带间充质干细胞（UC-MSCs）体外分离培养体系，研究其增殖能力、分化能力和生物学特性，为推广UC-MSCs在赛马运动损伤治疗方面的应用提供理论依据。【方法】采用I型胶原酶消化法从脐带组织分离马UC-MSCs，通过绘制生长曲线及计算群体倍增时间检测其体外增殖能力，结合流式细胞仪检测和RT-PCR扩增鉴定表面标志物（CD29、CD44、CD45、CD73、CD90和CD105），并通过体外成脂成骨诱导分化检测其分化潜能。【结果】分离获得的原代马UC-MSCs为折光性强的圆形悬浮细胞，培养10 d后细胞融合达90%，且传代后细胞增殖速度明显提高，传代至P3代，细胞呈旋涡状生长，形态为均一的长梭形，生长趋势符合Logistic生长曲线规律，呈典型的S形。流式细胞仪检测结果显示，马UC-MSCs高表达CD29、CD44和CD90，表达率分别为98.45%、97.08%和96.56%，呈强阳性，但不表达CD45;RT-PCR扩增结果表明，马UC-MSCs表达CD29、CD44、CD73、CD90和CD105等MSCs表面标志物基因，但不表达CD45基因。以胰岛素、IBMX、罗格列酮和地塞米松为主要试剂进行马UC-MSCs体外成脂诱导，诱导第10 d发现细胞内有小脂滴形成，至诱导第18 d有大量脂滴形成;选用抗坏血酸、β-甘油磷酸钠和地塞米松为主要试剂进行体外成骨诱导，至诱导第7 d可观察到钙结节形成。【结论】采用I型胶原酶消化法分離获得的马UC-MSCs纯度高，且具有良好的体外增殖能力和多向分化潜能;掌握好马UC-MSCs的有效冻存方式，可为治疗赛马运动损伤提供优质的种子细胞。

关键词： 马;脐带;间充质干细胞;生物学特性;I型胶原酶消化……