何启艇　邱波　龚明

[摘要] 目的 比较壳聚糖薄膜培养和常规平板培养对间充质干细胞（MSCs）干性相关基因表达的影响。 方法 从脐带中分离MSCs并分别进行壳聚糖薄膜培养和常规平板培养。采用Real-time RT-PCR和Western blot方法检测MSCs干性相关基因Nanog、Sox2、c-Myc、Oct-4 mRNA及其蛋白的表达。 结果 壳聚糖薄膜培养的MSCs能形成类球状体。壳聚糖薄膜培养的MSCs干性相关基因Nanog、Sox2、c-Myc、Oct-4 mRNA及其蛋白的表达水平较常规培养组显著增加，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。 结论 与常规培养的MSCs比较，壳聚糖薄膜培养的MSCs能形成类球状体，更能保持MSCs的干性。

[关键词] 壳聚糖；间充质干细胞；干性；骨关节炎

[中图分类号] R329.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）10（b）-0004-04

[Abstract] Objective To investigate the effects of cultivation modes （chitosan membrane and conventional plate） on the stemness of mesenchymal stem cells （MSCs） by comparing the related genes expression. Methods MSCs were isolated from umbilical cords and cultured on chitosan membrane and conventional plate. mRNA expression concerned with stemness related genes including Nanog， Sox2， c-Myc and Oct-4 were assayed by real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Corresponding proteins were detected by Western blot. Results Spheroid was formed by MSCs cultured on chitosan membrane. Compared with MSCs cultured on conventional plate， mRNA and protein expression levels of Nanog， Sox2， c-Myc and Oct-4 increased significantly in chitosan membrane-cultured MSCs， with statistically significant differences （P < 0.01）. Conclusion Compared with conventional culture， chitosan membrane-cultured MSCs can form spheroid， moreover， chitosan membrane can maintain the stemness of MSCs.

[Key words] Chitosan membrane； Mesenchymal stem cells； Stemness； Osteoarthritis

骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种以关节软骨退行性变为主要病理特征的疾病，其治疗仍是临床尚未解决的问题。间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）具有多向分化功能。研究发现，MSCs经诱导可以转化为软骨细胞修复关节软骨，对实验性OA具有治疗作用[1-2]。目前体外常规培养（two-dimensional culture，2D培养）不能够维持MSCs的性状稳定，主要表现在MSCs在常规的平板培养过程中发生衰老和向成骨细胞自主分化、增殖能力减退，严重影响了MSCs作为细胞治疗功能的发挥。本文旨在观察壳聚糖薄膜培养对人脐带MSCs干性相关基因表达的作用，探讨壳聚糖薄膜培养对MSCs干性的影响，为进一步探讨壳聚糖薄膜培养的MSCs在OA软骨修复中的作用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 MSCs的培养

本研究得到武汉大学人民医院（以下简称“我院”）伦理委员会同意，取得患者及其家属知情同意并签署知情同意书。脐带来自我院妇产科一分娩后健康产妇。用含100 μg/mL链霉素和100 U/mL青霉素的PBS（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，中国）充分洗涤脐带。……