陈丽燕++邓丽青++陈金花++钟郁++刘佳

摘 要：为优化骨髓间充质干细胞的分离和培养方法，采用改良的骨髓冲洗法分离骨髓干细胞，细胞接种后，比较不同体积分数胎牛血清（5%，10%，20%）、不同的DMEM/F12、H-DMEM和L-DMEM培养基，进行细胞培养，比较细胞生命状态。结果显示不使用筛网细胞分离细胞，应用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12M培养基培养，能够提高培养效率。

关键词：间充质干细胞；骨髓；培养

中图分类号：R329 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2017）19-0200-02

骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymalstem cells，BMSCs）是指存在于骨髓基质中的非造血组织的间充质干细胞，在体内分布于多种组织和器官，并具有多向分化潜能。它有着广泛的来源，包括骨髓，骨骼肌，软骨，骨，肌腱等[1]。故在干细胞研究领域中具有突出的优势。本实验对小鼠BMSCs的生物学性进行研究，旨在建立体外分离培养BMSCs的方法，培养出生长状态良好，足够数量的骨髓间充质干细胞是应用的前提，进一步为组织工程、细胞治疗和基因治疗研究提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验动物：6-8周龄SPF级昆明小鼠20只，體重30-40g （雌雄不拘），购自斯莱克景达公司，在本校标准化实验动物中心常规饲养。

主要试剂：DMEM/F12（Biological Industries公司）、H-DMEM培养基及L-DMEM 培养基（Sangon Biotech公司）、胎牛血清（FBS）（Sigma公司）、胰酶（GENVIEW公司）。

1.2 细胞分离方式

小鼠脱颈处死，置于75%无水乙醇的烧杯中浸泡5min，在无菌条件下取后腿股骨，清除表面肌肉组织。刺穿股骨，分别用DMEM/F12、H-DMEM或L-DMDM培养液（含10% FBS）冲洗骨髓，200目筛网过滤后，用1ml注射器注入细胞培养瓶，37℃，CO2培养。常规培养3～4天后用PBS冲洗两遍，全量换液去除非贴壁细胞。……