张榕珍，王黎霞，郭许情，张 健，张天宇，张建军，安 健*

(1. 北京农学院动物科学技术学院，北京 102206；2. 北京农业职业学院牧医系，北京102442)

巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima)是集约化鸡场常见的球虫之一，也是7种禽类艾美耳球虫中田间检出率较高的虫种[1-2]。由于该虫种免疫原性较高，近年来成为相关领域的研究热点。裂殖子是球虫无性生殖阶段的虫体。分离和纯化出大量虫体是研究球虫免疫学、生物化学、抗药性以及细胞共培养的基础。然而，目前关于裂殖子分离和纯化的报道十分有限，且主要集中在柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)，毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)和堆型艾美耳球虫(Eimeriaacervulina)，缺乏巨型艾美耳球虫裂殖子分离和纯化的相关报道。

巨型艾美耳球虫第1代裂殖子出现的最早时间是在感染后48 h，最短潜隐期为121 h[3-4]，但分离裂殖子的时间未被确定。此外，巨型艾美耳球虫被公认为寄生于小肠中段，但是能分离较多裂殖子的具体肠段未被细化。此前，有研究人员在不同接种时间分肠段对巨型艾美耳球虫的内生性发育进行研究，发现随感染时间的变化，裂殖子不同发育阶段的寄生部位有所改变[5]。

据报道，裂殖子可通过密度梯度离心法、酶消化法、过滤法和层析法进行纯化。有研究者将酶消化法与密度梯度离心法相结合，获得纯度较高的柔嫩艾美耳球虫2代裂殖子[6-7]。此外，通过DEAE-52纤维素柱层析法结合过滤法和差速离心法能获得纯净裂殖子[8-9]。该方法较好的避免了密度梯度制备过程中由于操作失误造成材料浪费的可能性，虽然过程复杂，但操作易于进行，获得裂殖子纯化程度较高，试验效果较为理想。……