高蔚娜 边祥雨 金秀 王玲玲 麻玉莹 于艺婧 蒲玲玲 郭长江

摘 要：目的：探讨60 μmol/L槲皮素调节BRL大鼠肝细胞谷胱甘肽（GSH）代谢的可能机制。方法：采用MTT法测定槲皮素对BRL细胞活力的影响;采用试剂盒法检测细胞内GSH和GSSG的含量，以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、肝脏谷胱甘肽 S转移酶（GST）、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（γ-GCL）、谷胱甘肽还原酶（GR）的活性;采用实时荧光定量PCR法检测GSH-Px、GST、γ-GCL和GR基因mRNA的表达情况;采用ELISA法测定细胞内的Keap1、总Nrf2、ERK1/2、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、JNK、p-JNK，以及细胞核Nrf2的蛋白水平。结果：槲皮素不影响大鼠肝细胞的活力（P>0.05）;与对照组比较，槲皮素组细胞内还原型GSH含量和GSH/GSSG比值（P<0.05）显著降低（P<0.05），γ-GCL酶活性显著减弱（P<0.05），GR和GSH-Px的mRNA表达显著减少（P<0.05），Keap1和JNK蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论：槲皮素可减少BRL大鼠肝细胞还原型GSH的含量，这种作用主要与槲皮素抑制GSH的生成有关。

关键词：槲皮素;谷胱甘肽;γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶;Keap1/Nrf2信号通路;MAPKs信号通路

槲皮素是一种类黄酮物质，也是分布最广泛的多酚类化合物之一，主要存在于蔬菜、水果、红酒、茶叶等食物和饮料中[1]。我国绝大多数水果和蔬菜中均含有槲皮素，尤其是水果中的山楂、冬枣、红提、石榴等，以及蔬菜中的洋葱、茴香、菠菜、球茎甘蓝、小白菜等[2]。槲皮素对人体有许多有益的作用，如抗氧化、抗炎、免疫调节、抗2型糖尿病、预防动脉粥样硬化等[3-7]。本课题组前期的研究显示[8-9]，以含0.5%槲皮素的AIN93饲料饲喂大鼠，大鼠肝脏和血清中的谷胱甘肽（GSH）含量、还原型GSH与氧化型GSH（GSSG）比值显著降低;血清中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性增强;肝脏谷胱甘肽 S转移酶（GST）活性和mRNA表达显著增强，而谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）活性和mRNA表达显著受抑，谷胱甘肽还原酶（GR）mRNA表达减少。……