沈旭晨，蔡培泉*，糜祖煌，王春新，赵 琪

1南京医科大学附属无锡人民医院呼吸与危重症医学科，江苏 无锡 214023；2无锡市克隆遗传技术研究所，江苏 无锡 214026；3南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科，江苏 无锡 214023

肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae，KP）通常存在于上呼吸道及肠道，是常见的条件致病菌。在近年的医院细菌耐药监测中，KP 检出率居第2 位［1-2］。高毒力型肺炎克雷伯菌（hypervirulentKlebsiella pneumoniae，hvKP）合并多重耐药在国内已有多次报道［3-5］，甚至新生儿也常有感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的报道［6］。KP对各种年龄段人群造成威胁，使临床治疗面临艰巨挑战。尽管目前国内外有大量hvKP 的研究报道［7-9］，但是缺乏肺炎克雷伯菌肺炎患者KP 分离株的毒力基因分布与临床特征相关性研究。本研究选定了与KP 主要毒力因子菌毛、荚膜、铁载体密切相关的fimH、mrkD、wabG、uge、ureA、entB、clbA、ybtA 这8 种毒力基因进行检测，并分析其与患者临床特征的相关性，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象

选取2019 年8—9 月南京医科大学附属无锡人民医院住院患者各种临床标本中分离出KP 菌株的50 例肺部感染患者作为研究对象。本研究经医院伦理委员会批准，所有患者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 细菌鉴定与药敏分析

细菌鉴定与药敏分析采用法国生物梅里埃公司VITEK-2全自动细菌鉴定及药敏分析仪。

1.2.2 靶基因检测

细菌DNA 提取采用非离子去污剂Triton X-100裂解加蛋白酶K 消化法。菌株先作纯培养，然后挑取单个菌落置入已预混好的Triton X-100 与蛋白酶K 溶液中，55 ℃温浴120 min，再95 ℃温浴10 min。-20 ℃保存待检。

PCR 检测毒力基因。每种毒力基因检测PCR扩增的反应系统均为：耐热DNA聚合酶（TaKaRa 公司，日本）1 U（0.2 μL），耐热DNA聚合酶匹配的10×缓冲液2 μL；……