王圆梦 王姿杨 高国香 刘广义 张小荣 邵晶

摘要 [目的]筛选出大黄提取物制备药用牙膏的最佳工艺。[方法]采用HPLC法测定大黄提取物中蒽醌类化合物的含量，以所加蒸馏水温度、搅拌总时长、大黄提取物加入先后顺序为制备工艺主要影响因素，考察不同工艺条件对大黄提取物牙膏感官性状的影响。[结果]所测蒽醌类成分符合试验要求。最终确定水温50 ℃、搅拌15 min、大黄提取物预先与丙三醇混合的试验工艺，方可使得膏体长时期稳定不变色。[结论]制备所得的大黄提取物药用牙膏膏体细腻光亮、气味清凉、黏稠度适中，制备工艺稳定可行。

关键词 大黄提取物;药用牙膏;制备工艺;高效液相色谱

中图分类号 TQ658.41文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2021）07-0177-03

Abstract [Objective]To screen out the best technology for preparing medicinal toothpaste with rhubarb extract.[Method]HPLC method was used to determine the content of anthraquinones in rhubarb extract.To investigate the effects of different technological conditions on the properties of rhubarb extract toothpaste based on three main factors： the temperature of distilled water，the total stirring time and the order of adding rhubarb extract.[Result]The anthraquinone components were in conformity with the experimental requirements.The technology of 50 ℃ water temperature，stirring for 15 min，rhubarb extract mixed with glycerol in advance was best for the paste to maintain stable and nondiscoloration for a long time.[Conclusion]The rhubarb extract toothpaste paste is fine and bright，with cool smell and moderate viscosity，and the technology is feasible.

Key words Rhubarb extract;Medicated toothpaste;Preparation technology;High performance liquid chromatography

作者简介 王圆梦（1997—），男，甘肃礼县人，硕士研究生，研究方向：药用植物资源开发利用与保护。*通信作者，教授，博士，硕士生导师，从事中药活性物质基礎与质量控制研究。

口腔是人类进食的器官，消化的起点，作为保卫人体健康的“门户”显得尤为重要。第四次全国口腔健康流行病学调查显示97%成人罹患口腔疾病。当今时代，社会生活节奏加快，高强度的工作以及巨大的生活压力使得人们在饮食上更加青睐于辛辣刺激、方便速食，尤其是我国国民普遍喜食火锅、烧烤类食物，长此以往便会给身体积累出现各种各样的隐患。生活中常见由于胃火上炎导致的口腔炎症及溃疡，降低生活质量，且长期的口腔溃疡是导致口腔癌的主要原因之一[1]。医学研究发现，口腔疾病不仅影响口腔健康，还与癌症、慢性呼吸道疾病、心血管疾病和糖尿病等全身系统性疾病的发生关系密切[2]。因此，口腔健康应该受到人们的关注。

大黄为传统中药材，其主要来源于蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根和根茎[3-4]，具有祛热利泻、行瘀通经等功效。大黄主要含有大黄素、大黄酸、芦荟大黄素等蒽醌类成分及以番泻苷为代表的双蒽醌类成分。现代研究表明，大黄中的蒽醌类成分具有抗炎、抑菌、止血、抗氧化等功效。大黄提取液具有抑制牙釉质脱矿的作用，可以减缓牙齿外层牙釉质的溶解[5];大黄素对多种致病菌有抑制作用，且同时具有抗氧化性，对牙周局部有免疫抑制，对于治疗牙周炎具有较好的作用[6]，也有研究者将大黄素制成口腔用品的相关报道。笔者以大黄提取物为原料，以提取物中蒽醌类物质含量为指标，探究不同辅料及制备工艺对于大黄药用牙膏感官性状的影响，以优选其制备工艺，为大黄提取物制备中药药用牙膏的可行性提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备 LC-16型岛津高效液相色谱仪（中国岛津苏州有限公司）;HH-601型水浴锅（金坛市恒丰仪器厂）;DZF-6020真空干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）;102电热鼓风干燥箱（龙口市先科仪器公司）;BS-110S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）;KQ-500DE超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;SY-5000旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。

1.2 试材与试剂 对照品芦荟大黄素（T28D6F8264）、大黄酸（T30A8F42628）、大黄素（C18F8Q29652）、大黄酚（T24J10F93796）、大黄素甲醚（T09M9F55482）均由上海源叶生物科技有限公司提供。十二烷基硫酸钠（H0218）、丙三醇、碳酸钙（H00389）均由天津大茂化学试剂厂提供。糖精钠（S817755-01）、L-薄荷醇（S817756-01）均由上海麦克林生化科技有限公司提供。甲醇为色谱纯，水为纯净水;其他试剂均为分析纯。试验用药材大黄购自甘肃奋力达仪器有限公司，经甘肃中医药大学晋玲教授鉴定为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）的干燥根。

1.3 大黄提取物的制备及质量评价

1.3.1 大黄提取物的制备。取4份干燥大黄药材，每份150 g，加8倍量无水乙醇，于室温浸渍12 h，后80 ℃水浴回流提取2 h，滤过，药材残渣再加6倍量无水乙醇80 ℃水浴回流提取1 h，滤过，70 ℃水浴减压回收乙醇，所得糖浆状物置于烘箱内，60 ℃减压干燥，得膨松状干燥物，研磨成粉，装于密封袋内，于冰箱中储存待用。

1.3.2 大黄提取物中蒽醌类化合物的含量测定。

1.3.2.1 色谱条件[7]。Agilent HC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）为流动相;检测波长254 nm。柱温30 ℃;流速1.0 mL/min。

1.3.2.2 对照品溶液的制备。精密称取大黄酚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄素甲醚对照品各适量，置于10 mL容量瓶中，于室温加甲醇振摇溶解，并定容至刻度，得到混合对照品溶液的浓度分别为132、24、88、41、61 μg/mL。

1.3.2.3 供试品溶液的制备。取“1.3.1”项下制得的浸膏粉0.701 2 g，置于具塞锥形瓶内，精密加入甲醇50 mL，称定重量，水浴回流60 min，冷却至室温后再次称重，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，过滤，移取续滤液5 mL于烧瓶中，水浴挥干溶剂，加8%盐酸溶液10 mL，超声溶解，再加入10 mL三氯甲烷，水浴回流提取60 min，冷却至室温后，倒入分液漏斗中，加入三氯甲烷萃取3次，每次10 mL，收集合并萃取液，减压回收三氯甲烷至小体积，水浴挥干，残渣用甲醇溶解至10 mL容量瓶中，并定容至刻度线，摇匀，过微孔滤膜，取续滤液，即得。

1.3.2.4 线性关系的考察。混合对照品溶液经微孔滤膜过滤后，移至进样瓶中，按“1.3.2.1”色谱条件，分别进样5、10、15、20、25、30 μL，用高效液相色谱仪进行测定，对比各成分的出峰位置并记录峰面积，以进样浓度X（μg/mL）为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算得出线性回归方程。

1.3.2.5 大黄提取物中各蒽醌类成分含量测定。分别精密吸取供试品溶液20 μL，按“1.3.2.1”色谱条件进行检测，对比各成分的出峰位置并记录峰面积，分别带入回归方程计算，最终得到4份样品中各成分的平均质量分数。

1.4 大黄药用牙膏的制备工艺研究

1.4.1 辅料的筛选。通过参考文献资料，药用牙膏常用的主要辅料有：摩擦剂用碳酸钙、磷酸氢钙，增稠剂用羧甲基纤维素钠（CMC-Na）、黄原胶，发泡剂用十二烷基硫酸钠，保湿剂用丙三醇，防腐剂用苯甲酸钠，甜味剂用糖精钠，香料用L-薄荷醇。按照试验目的，通过预试验筛选剔除部分辅料。

1.4.2 成型工艺。将糖精钠、苯甲酸钠等水溶性原料用蒸馏水溶解，作为预混合物1;取CMC-Na快速搅拌下分散在丙三醇中，作为预混合物2;称取碳酸钙、十二烷基硫酸钠等混合研磨，作为预混合物3;将蒸馏水加入到烧杯中，加入预混合物1、预混合物2，快速搅拌，待混合液稀稠，加入预混合物3继续搅拌，加入香精，高速搅拌一定时间，最后膏体用复合软管包装。通过预试验研究发现，影响牙膏成型的因素主要为加入蒸馏水的温度、搅拌总时长、大黄提取物加入的先后步骤等，因此试验设9个制备工艺条件如表1所示，调整水温、搅拌时长、大黄提取物的加入步骤，制备出大黄提取物牙膏。

1.4.3 品质评价。以牙膏的外观、拉丝现象为指标，采用感官评价法进行评价[8]。

2 结果与分析

2.1 线性关系的考察 按“1.3.2.4”方法操作，以进样浓度X（μg/mL）为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，计算得出各成分的线性回归方程和线性范围如表2所示。结果表明，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种蒽醌类成分分别在0.120～0.720、0.440～2.640、0.205～1230、0.660～3.960、0.305～1.830 μg/mL线性关系良好，相关系数r均为1.000 0。

2.2 大黄提取物中各蒽醌类成分含量测定 按“1.3.2.5”方法操作，得到4份样品中各成分的平均质量分数见表3。结果显示，大黄提取物中以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚总量计，总蒽醌含量平均为56.38 mg/g。

2.3 大黄药用牙膏的制备工艺研究

2.3.1 辅料的筛选。按“1.4.1”方法操作，最终确定大黄药用牙膏的配方如表4所示。

2.3.2 成型工艺条件的筛选。由表5可知，牙膏的外观受所加入溶液温度的影响最大，其次是搅拌时间，这与最终膏体是否均匀黏稠有关;大黄提取物加入的先后顺序对膏体储存过程中颜色的变化影响最大。最终确定水温50 ℃、搅拌15 min、大黄提取物预先与丙三醇混合的试验工艺，所得膏体细腻均匀、气味清凉、口感舒适。

3 讨论与结论

目前牙周病在世界范围都非常普遍，多集中在成年人群。对于细菌性疾病，医疗卫生领域多采用抗生素等易产生耐药性的治疗方法。而中草药牙膏可避免细菌的耐药性，给口腔健康更有效的保护。大黄在口腔健康上发挥的作用主要与其抗炎、抑菌、止血、抗氧化功效相关。蔡秀红等[9]取大黄9 g，煎取药液300 mL，漱口1～2 min后吐掉，每天4～6次的方法用于治疗过量食用煎炒辛辣食物引发的口腔溃疡，并收录入由国家中医药管理局主管的《中国民间疗法》中“口腔溃疡民间疗法”项下。笔者通过对大黄活性成分治疗口腔疾病的相关文献分析，结果显示大黄提取物对牙周炎等口腔疾病有一定的抑制和组织修复作用。现代藥理学研究显示，大黄素、芦荟大黄素均具有抑菌消炎作用，其中大黄素具有广谱抑菌作用，对金黄色葡萄球菌不易产生耐药性，对链球菌亦很敏感，其次对肺炎双球菌、链球菌、白喉杆菌、枯草杆菌、炭疽杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌及多种常见的致病性真菌均有较强的抗菌作用。郭阳等[6]通过小鼠试验探讨了大黄素对于牙周炎的抗氧化作用，结果显示大黄素可以显著提高超氧化合物歧化酶（SOD）活性，降低血清中丙二醛（MDA）含量，同时刺激谷胱甘肽过氧化酶的活性，给促进牙周组织恢复带来了福音。鞣质是大黄止血的重要活性成分，此外，大黄鞣质还对组织损伤具有保护作用[10]，对牙龈出血有一定作用。因而，大黄提取物制备的药用牙膏应该具有一定的市场推广价值。