毕付提，史亚楠，张久祎，王静然，薛鲜丽，2，王德培，2*

（1.天津科技大学生物工程学院，天津 300457；2.工业发酵微生物教育部重点实验室，天津 300457；3.江苏恒顺醋业股份有限公司，江苏 镇江 212000）

米曲霉作为食品安全菌种，广泛应用于发酵食品如生产米酒、酱油等。同时由于其能分泌大量的酶，也用于淀粉酶、蛋白酶、果胶酶、脂肪酶等多种酶制剂的生产。近年来通过基因改造，米曲霉还用于生产多种有机酸如苹果酸、曲酸等。由于米曲霉独特的代谢特征可产生多种被人类所需要的产品，已成为丝状真菌中的重要研究对象。

传统针对米曲霉的改良，一般是通过诱变的方法进行。随着分子生物学技术的发展，希望能有效地、有目的性地对米曲霉代谢产物相关基因进行针对性改造以获得更好的生产性能。抗性筛选是基因改造过程中必不可少的途径，但米曲霉自身具有较高的耐药性，很少有外源抗性标记可直接用于米曲霉的改造[1]。据报道潮霉素抗性标记hyg[2-3]，博来霉素抗性标记ble[4]曾成功用于米曲霉真菌遗传转化，但是需要额外加辅助剂氯丙嗪和曲拉通来增加菌株敏感性。即便加入辅助剂，其对潮霉素抗性达到600 μg/mL，导致筛选过程假阳性率极高。此外，成功用于米曲霉遗传转化的抗性标记还有吡啶硫胺素[5-6]、萎锈灵[7]、腐草霉素[8]，但使用浓度也高于一般丝状真菌如黑曲霉，而这些抗性标记转化筛选系统所需抗生素价格昂贵，这限制了其在米曲霉基因操作中的应用。……