邱 红，李艳红，王晓君，吕 勤

（宁波市妇女儿童医院，浙江宁波 315000）

目前，坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocoli⁃tis，NEC）仍然是构成新生儿死亡率及患病率增加的主要原因［1］。NEC 严重影响消化系统功能，甚至引起休克、酸中毒等症状［2］。由于缺乏可靠的和可预测的生物标记物，加上缺乏有效的治疗，NEC 仍是导致早产婴儿疾病的严重问题，阐明NEC 发病相关基因的潜在作用具有重要意义。摄食调节肽nesfa⁃tin-1 是一种来源于核结合蛋白2 的82 个氨基酸多肽，其在胃肠道、胰腺和内分泌腺中表达，在调节食物摄入、能量/葡萄糖稳态和肠道运动中发挥重要作用［3-4］。除了在创伤性脑损伤、蛛网膜下腔出血和睾丸损伤中的抗炎和抗凋亡作用外，还有研究报道了nesfatin-1通过直接抗炎机制在胃和结肠中发挥保护作用［5］。然而nesfatin-1在NEC 胃肠道损伤中的影响尚未见报道。Toll 样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）属于TLR 家族，在免疫炎症反应中起着关键作用［6］。缺氧、手术、感染和其他应激因素触发TLR4级联并激活核因子κB 信号通路，提高趋化因子和炎症因子的表达［7］。阻断TLR4 介导的炎症反应有助于防止胃肠炎发生［8］。尽管nesfatin-1 已被报道抑制结肠炎中TLR4 信号激活［9］，但其对NEC 的影响在很大程度上是未知的。在本研究中，我们检测了在NEC 组织和LPS 诱导的肠细胞中nesfatin-1的表达水平，并评估了nesfatin-1 对免疫应答及对免疫应答的影响及其潜在机制。

材料和方法

1 材料

胎牛血清购自Gibco；DMEM/F-12 培养基购自HyClone；Lipofectamine 2000 购自Invitrogen；白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）、IL-10 和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的ELISA试剂盒购自Abcam；Trizol试剂、RNA PCR试剂盒和SYBR Green I购自TaKaRa；StepOne Plus 实时荧光定量PCR 系统购自Applied Biosystems；RIPA裂解缓冲液购自Solar⁃bio；……