彭 萍 何力志 彭 鑫 张 裕 焦芳艳

（1.湖南省脑科医院（湖南省临床检验中心免疫室） 湖南长沙 410007；2.罗氏诊断产品（上海）有限公司）

1 前言

我国是乙肝病毒（HBV）感染大国，据统计我国约有1 亿人携带HBV，HBV 是我国肝炎患者的主要诱导原因， 若不能及时诊断治疗， 可能会引起肝硬化，甚至是肝癌[1，2]。HBV DNA 实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测技术具有高灵敏性和高特异性，可定量HBV DNA 水平，从而反应HBV 的传染性，对临床上评价抗HBV 药物的临床效果和预后判定具有重要意义[3，4]。 国际标准品HBV DNA 定量检测试剂盒是国际上公认的检测试剂盒，具有高灵敏度、高特异性，但价格昂贵，给患者带来了一定的经济负担[5]。 国产试剂盒可减轻患者经济负担，但目前生产种类较多，灵敏度、线性范围、特异性存在明显差异[6]。 本文选取3 种不同国产超敏HBV 定量检测试剂盒，分析3 种国产试剂盒的准确性，并分别与国际标准品HBV DNA 定量检测试剂盒通过相关性和一致性进行评价分析。

2 研究对象与方法

2.1 研究对象

收集HBV 感染患者的血浆210 份，所有患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015 年版）》诊断标准，均为单一HBV 感染患者。

2.2 主要材料

WHO 国际标准品4th WHO International Standard for HBV DNA for NAT （10/266）。 标准HBV DNA检测试剂盒（瑞士罗氏诊断产品有限公司，批号：251559）；国产HBV DNA 检测试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司，批号：2018005）；国产HBV DNA 检测试剂盒（湖南圣湘科技有限公司，批号：2018004）；国产HBV DNA 检测试剂盒（厦门安普利生物工程有限公司，批号：201804015）。 国际标准品检测试剂盒采用COBAS Am-pliPrep 提取仪、扩增试剂为COBAS HBV Testv2.0（瑞士，Roche）；国产HBV 检测试剂盒检测方法采用Smart 32 全自动核酸提取；采用超敏PCR 扩增试剂（国产中山大学达安基因股份有限公司），荧光定量PCR 仪（美国ABI 7500 型）；PCR 分析仪（Roche 公司，COBAS Ampliprep/COBASTaqMan 48 II）。 3 种试剂盒自带阳性标准品定量范围详见表1。

表1 3 种试剂盒自带阳性标准品定量范围

2.3 检测方法

210 份HBV 患者血浆标本均采用国际标准HBV DNA 检测试剂盒及A、B、C 国产HBV DNA 检测试剂盒，对3 种国产试剂盒的准确性和精密度进行验证[6]，按照试剂盒检测方法进行检测，各检测试剂盒特征详见表2。

2.4 统计方法

所有数据采用SPSS26.0 进行统计，阳性检出率采用构成比[n（%）]表示，spearman 相关分析不同国产品牌实时荧光定量PCR 检测试剂盒与国际标准HBV DNA 检测试剂盒的相关性，采用Bland-Altman分析同国产品牌实时荧光定量PCR 检测试剂盒与国际标准HBV DNA 检测试剂盒的一致性，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 3 种国产试剂盒准确度测定结果比较

A、B、C 3 种试剂盒检测阴性样本3 次结果均为0 IU/mL，准确度评估结果均为通过，详见表3。

表3 3 种国产试剂盒准确度测定结果比较

3.2 3 种国产试剂盒精密度比较

A、B、C 3 种国产试剂盒的精密度符合要求，符合检测浓度对数值的变异系数（CV）＜5%，批内精密度s≤3/5Ea（0.24），且A（CV%）＞B（CV%）＞C（CV%），详见表4。

3.3 4 种不同HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒检测结果比较

本次研究共检测210 份HBV 患者血浆样本。国际HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒的检测结果如下，共检出167 例（79.5%）患者为阳性，A国产HBV DNA 检测试剂盒阳性检出166 例（79.0%）患者为阳性，B 国产HBV DNA 检测试剂盒阳性检出163 例（77.6%）患者为阳性，C 国产HBV DNA 检测试剂盒阳性检出160 例（76.2%）患者为阳性，经比较4 种不同HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒阳性检出率，统计量χ2值为0.835，P 值为0.841，组间差异没有统计学意义（P＞0.05）。

表4 3 种国产试剂盒精密度结果

3.4 4 种不同HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒检测结果相关性比较

在20～1.7×108IU/mL 区间内将A、B、C 3 种国产试剂盒与国际HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒检测的结果，进行相关性分析，分析结果显示A、B、C 3 种国产HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒检测的结果与国际HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒检测的结果相关系数r 分别为0.981、0.976、0.979、0.973，P 均小于0.001，差异有统计学意义（P＜0.001），详见表5。

表5 4 种HBV DNA 检测实时定量检测试剂盒检测结果相关性

3.5 4 种不同HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒检测结果一致性比较

在20～1.7×108IU/mL 内将A、B、C 3 种国产HBV DNA 与国际HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒检测的结果，进行一致性分析，Bland-Altman 分析结果显示，A 国产HBV DNA 实时荧光定量检测试剂盒与国际HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒定量值差值平均值为0.162log 10 IU/mL，95%可信区间为（-0.677 3～1.056 1）log10 IU/mL，98.1%（149/152）的样本检测值在95%可信区间内。B 国产HBV DNA 实时荧光定量检测试剂盒与国际HBV DNA 实时荧光定量PCR 检测试剂盒定量值差值平均值为0.159log10 IU/mL，95%可信区间为（-0.612 1～1.023 1）log10 IU/mL，95.6%（151/158）的样本检测值在95%可信区间内。 C 国产HBV DNA 实时荧光定量检测试剂盒与国际HBV DNA 实时荧光定量PCR检测试剂盒定量值差值平均值为0.169log10 IU/mL，95%可信区间为（-0.599 1～1.032 4）log10 IU/mL，98.6%（145/147）的样本检测值在95%可信区间内，详见表6。

表6 3 种HBV DNA 检测实时定量检测试剂盒检测结果一致性

4 讨论

HBV 实时荧光PCR 定量检测试剂盒已广泛应用于乙肝患者的临床诊断，其准确度高、重复性好被认为是HBV DNA 定量检测的标准[7，8]。 国际HBV DNA实时荧光定量PCR 检测试剂盒具有高灵敏度、高精密度等优点，但价格昂贵、所需样本量大、耗时长在中小医院难以普及[9]。 因此，开发国产实时荧光定量PCR 检测试剂盒用于HBV DNA 定量检测具有重要的临床意义。

本次研究选取3 种不同国产HBV 实时荧光PCR 定量检测试剂盒与进口的国际标准HBV 实时荧光PCR 定量检测试剂盒进行比较，首先对3 种国产试剂盒进行准确度和精密度性能确认，结果表明A、B、C 3 种国产试剂盒准确度和精密度良好，从精密度数据看A（CV%）＞B（CV%）＞C（CV%），由此可知C 国产试剂盒精密度最好，性能确认数据表明3 种国产试剂盒准确性良好。 3 种检测试剂盒的提取方法一致，均从血浆中提取，在模板上获取效率一致，由表1 可以看出国产试剂盒的检测限和检测范围均高于进口国际标准试剂盒。通过比较A、B、C 国产试剂盒与国际标准试剂盒的阳性检出率发现，国产试剂盒与国际标准试剂盒的检出率基本一致。 比较国产试剂盒与国际标准试剂盒检测结果的相关性和一致性发现在20～1.7×108IU/mL 相关性和一致性均较好。 本次研究选取了3 个不同厂家的国产试剂盒与国际标准试剂盒进行比较，进一步说明了国产试剂盒与国际进口标准试剂盒诊断效果相当，而以往研究[10]一般只选择一种试剂盒与国产进口试剂盒比较，本文的研究更具说服力。本文的研究局限在于只在国际标准试剂盒线性检测范围内进行比较， 该范围较大，缺乏对低检测区间范围、中检测区间及高检测区间的相关性和一致性比较，此外缺乏20～1.7×108IU/mL 内的比较。 后续课题组将继续细化研究，利用已知浓度的国际标准品作为校正品，对比分析国内不同厂家HBV DNA 定量试剂盒内标准品间存在的实测值与理论靶值的浓度差异、稳定性差异及其相关性，为国内HBV DNA 定量检测试剂盒所使用的标准品的制备及使用建立更加规范统一的标准，使HBV DNA 检测结果更加准确、可靠，从而减少实验室间检测差异带来的医患纠纷。

综上所述，上述3 种不同国产的HBV DNA 检测试剂盒准确性良好，与国际标准品HBV DNA 检测试剂盒在检测区间20～1.7×108IU/mL 内均具有较好的相关性和一致性，但仍需细化研究，以期提高国产试剂质量。