刘欣欣

摘要：高效液相色谱法具有灵敏度高、时效高以及操作简单等多种优点，能够很好的对单糖进行有效分析。由此，本文将详细阐述通过高效液相色谱法检测单糖的几种方法，主要包括：柱前衍生法、柱后衍生法、蒸发光散射检测法、示差折光检测法、电喷雾检测法等。并从这几种方法的精确度、灵敏度以及操作方法等方面进行分析，详细阐述这几种方法的优点和缺点，希望可以为相关工作人员提供参考。

关键词：检测技术;高效液相色谱法;应用方法;研究进展;单糖

碳水化合物就是我们众所周知的“糖”，这种物质是维持生命正常活动的主要能量，在自然界中有着广泛的分布。而糖类有着4种存在形式，分别是多糖、单糖、低聚糖以及双糖。其中，多糖具有抗肿瘤、美白保湿、降血糖、抗肿瘤、抑菌、降血脂以及抗感染等多种功效。所以，通过对多糖中的单糖组分进行研究，      對研究其生物活性有着十分重要的作用;而通过高效液相色谱法进行检测，能够获取更为准确的信息，也在相关研究中得到广泛应用。

一、柱前衍生法

1.邻氨苯甲酸衍生法

因为邻氨苯甲酸存在着一定的刺激性以及毒性，不仅会对人体造成危害，还会对环境带来破坏，导致其在实际中很少应用。有发达国家的研究人员通过将邻氨苯甲酸作为单糖的衍生试剂进行分析，发现其具有灵敏度高、操作简单以及易获得等多种优点。还有国内的研究人员通过使用其作为衍生剂，结合高效液相色谱法对单糖进行检测，发现这种方法具有很高的回收率，还具有可重复操作性的特点。但是，因为其对流动相有着很高的要求，再加上这一衍生剂具有毒性，在使用这种方法时需要按照相关流程操作，避免出现意外，故其使用范围受到一定限制。

2.对氨基苯甲酸衍生法

由于对氨基苯甲酸属于苯甲酸的苯环上对位被氨基取代后所形成的的一种化合物，存在中等程度的毒性。通过其能够与单糖产生反应，获取一种可以被检测的物质，这种检测方法均有灵敏度高、操作简单的特点，能够快速并准确对样品进行检测。然而，由于其存在着一定的毒性，所以在现实中的应用比较少。有研究人员通过这种方法对9种单糖进行检测，并适当的对衍生条件进行了一定的优化。发现通过对衍生条件进行优化后，测得9种单糖的RSD值均低于4%，r2均大于0.997，有着十分良好的线性关系，单糖衍生化产物的峰面积也没有出现较大变化。然而，其中也存在几种单糖分离度不佳的问题，所以，通过对HPLC-FID法对酸浆多糖进行检测，并开展梯度洗脱，从中分离的几种单糖效果较好，而且灵敏度也比较高，但是操作步骤比较繁琐[1]。

二、柱后衍生法

现如今有关柱后衍生法的参考资料并不是很多，只有小部分研究人员采用这种方法开展对单糖的检测。有国内研究人员基于柱后衍生法，结合高效液相色谱荧光法对4种单糖（D-果糖、山梨醇、D-葡萄糖、D-阿拉伯糖）进行检测，发现这种检测方法有阵令人满意的灵敏度，然而这种检测方法过于复杂，再加上1-萘硼酸有着一定的毒性，这就极大的影响了该方法的使用范围[2]。

虽然柱前衍生法具有检测成本低的优点，但是其在衍生时，很容易引入部分杂质，这就会对色谱分离造成极大的影响，甚至会导致试验结果出现误差。而柱后衍生法即使产生了副产物，也不会对试验的结果造成影响，并且其对稳定性没有很高的要求，但是需要有相关的设备，这样会提高成本投入，再加上反应条件存在限制，所以未得到广泛应用。

三、示差折光检测法

液相色谱示差折光检测法是我国目前单糖测定的标准方法。这种方法需要使用专门的示差折光检测器进行检测，通过这种方法对单糖进行检测不需要衍生处理，所以能够有效提高检测效率，并能够很好的对各种组分进行分离，得到了十分广泛的应用。然而，这种方法很容易受到流速、流动相以及温度环境等多种因素的影响，导致其灵敏度不佳，还无法使用梯度洗脱。

四、蒸发光散射检测法

液相色谱蒸发光散射检测法也是需要使用相关的仪器进行检测，主要是蒸发光散射检测器，这是一种基于示差折光检测器而诞生的仪器。这种检测方法的优点在于不仅能够保留示差折光检测器的优点，还可以弥补其存在的弊端，如无法被梯度洗脱、灵敏度不佳等，还可以有效的消除温度以及流动相对其造成的影响。有研究人员使用这种方法对10种蜂蜜中的单糖进行检测，发现检出限为每升10毫克，确认其能够很好的弥补示差折光检测器的不足[3]。

电喷雾检测法

液相色谱电喷雾检测法是近年来一种新兴技术，其是一种基于蒸发光散射检测器而诞生的仪器，是一种通用型质量检测器。其较蒸发光检测器灵敏度在同一化合物的检测限可高出一个数量级，且重现性好、检测范围更宽，且其工作温度基本在常温下完成，对活性物质的热稳定性影响较小，在一定程度上弥补了蒸发光散射检测器的不足，在单糖检测方面已开始应用，有待进一步拓展[4]。

六、结束语

总而言之，近些年来在单糖的分析中高效液相色谱法得到了十分广泛的应用，通过对其使用的现状进行分析，可以发现未来的研究方向应该有两点：首先，在柱前衍生中，PMO柱前衍生的使用范围最为广泛，然而在进行操作时需要加入衍生剂，这就会导致部分杂质融入其中，影响到试验结果的准确性。所以，就需要解决掉误差问题。其次，蒸发光散射检测法及电喷雾检测法具有灵敏度较高无需衍生的特点，但是正是因为不需要衍生导致其保留及各单糖组分间分离度较差，这就需要想办法提高其保留及分离度，才能够更好的得到应用。

【参考文献】

方宏， 曾健智. 高效液相色谱法检测蔗渣光纤维素水解物中的单糖[J]. 广西科学院学报， 2018，16（3）：124-126.

[2]热孜万古力·赛买提， 陈士恩， 高丹丹，等. 单糖高效液相色谱法检测技术研究进展[J]. 食品与机械， 2018，v.34;No.196（2）：191-196.

[3] 田灵敏， 邱雪梅， 潘子敬， 等. 新型糖组成高效液相色谱分析技术的构建及其在水飞蓟多糖质控中的应用[J]. 药学学报，2018，（4）：90-96.

[4]李心怡，蒋运斌，马逾英.电喷雾检测器在药物HPLC分析中的优势及应用进展[J]. 中国药房，2017，28（15）：2152-2155.