王萌萌，梁日文,孔凡虹，宗曾艳，张水兰，阚丽娟，汤花梅，张秀明，，熊丹，(1.安徽理工大学，安徽淮南 001；.深圳市罗湖区人民医院检验科，广东深圳 518001；.嘉应学院医学院，广东梅州 51401)

EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)又称为人疱疹病毒4型，具有嗜淋巴细胞的特点，是第一个被确认的人类致瘤病毒，与多种恶性肿瘤的发生密切相关。EBV主要通过唾液和性接触传播，也可通过器官移植和输血途径感染。呼吸道是EBV潜伏感染的主要部位。EBV感染常发生在婴儿期，6岁以下儿童多呈隐性或轻型感染，15岁以上儿童或成人感染后多出现典型症状，表现为发热、咽峡炎、淋巴结及肝脾肿大、外周血中淋巴细胞增加并出现异常淋巴细胞等[1-2]。我国由EBV感染导致的原发传染性单核细胞增多症(IM)主要发生在青少年或儿童[2-4]。本研究主要根据EBV核酸定量结果，分析深圳罗湖区儿童EBV感染现状，并结合临床相关流行病学资料，以指导临床对儿童EBV感染的早发现、早诊断及早治疗。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取深圳市罗湖医院集团2018全年收治的疑似EBV感染患儿1 616例为研究对象，其中男童950例，女童666例。纳入标准：年龄≤12岁，伴不明原因的发热、呼吸道感染等症状，临床资料完善。排除标准：药物治疗后复查患者、肿瘤患者及临床资料不全患者。根据患儿的年龄分为4组，分别为婴儿组(0～1岁)315例、 幼儿组(1～3岁)528例、学龄前组(3～6岁)519例、学龄组(6～12岁)254例。选取其中180例入院开展治疗前儿童的全血样本同时进行全血抗体和EBV DNA检测。

1.2仪器与试剂 ABI 7500 PCR扩增仪(Applied Biosystem 公司)，UNION-C免疫分析仪(深圳亚辉龙公司)；EBV核酸定量检测试剂盒(湖南圣湘公司)，EBV衣壳抗原抗体(EBV CA IgM/IgG)试剂盒、EBV早期抗原IgM抗体(EBV EA IgM)试剂盒、EBV核心抗原IgG抗体(EBV NA IgG)检测试剂盒(深圳亚辉龙公司)。

1.3方法 用荧光定量PCR法检测全血或咽拭子EBV DNA载量，按照试剂盒说明书进行EBV核酸提取和扩增定量分析。全血样本或咽拭子EBV DNA含量>4.0×102copies/mL作为阳性标准。在UNION-C免疫分析仪上用酶联免疫法检测EBV血清学抗体，包括EBV CA IgM/IgG、EBV EA IgM、EBV NA IgG。读取每个样本吸光度值与相应标准品的吸光度值，以两者比值≥1.0判读为阳性，<1.0判读为阴性。

1.4统计学分析 用SPSS 20.0软件进行。不同年龄组、性别、季节间EBV感染率比较用配对χ2检验进行，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1EBV总体感染状况 1 616例患儿中，EBV DNA阳性者共413例，阳性率25.6%；其中男童阳性222例，检出率23.4%；女童阳性191例，检出率28.7%。学龄组EBV阳性率最高，达40.2%；婴儿组最低，为3.5%；各年龄组EBV感染率差异有统计学意义(P均<0.05)。各年龄组不同性别之间EBV感染率差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 不同年龄组和性别间EBV检出率比较

2.2儿童EBV感染的季节分布 结果显示深圳罗湖地区儿童四季EBV感染率差异有统计学意义(χ2=20.693，P<0.001)。其中，秋季(9～11月)EBV感染率最高(32.0%，120/375)，冬季(11～12月，1月)最低(18.5%，83/448)，秋、冬两季EBV感染率差异有统计学意义(χ2=19.942，P<0.001)。见表2。

2.3EBV核酸定量阳性患儿临床表现分布 413例EBV核酸定量检测阳性患儿中，临床表现以呼吸道感染为主。其中支气管肺炎166例，占40.2%，其余依次为急性上呼吸道感染55例(13.3%)、急性支气管炎67例(16.2%)、肺炎22例(5.3%)、扁桃体炎27例(6.5%)、咽峡炎12例(2.9%)。此外，不明原因发热17例(4.1%)、惊厥5例(1.2%)、淋巴结病变5例(1.2%)、腹泻4例(1.0%)、全身炎症反应综合症4例(1.0%)。过敏性紫癜、支原体感染、手足口病、疱疹、癫痫、川崎病等其他临床表现的发病率较低(合计7.0%)。

表2 不同季节阳性率比较

2.4EBV全血抗体和EBV DNA检测结果相关性 经过血清学抗体和PCR载量检测的180例儿童全血样本中，血清学抗体和PCR载量检测结果可分为10种感染模式，见表3。EBV抗体检测结果中，EBV CA IgM阳性率为37.8%(68/180)，EBV DNA检出率为38.3%(69/180)，差异无统计学意义(χ2=0.012，P>0.05)。68例EBV CA IgM阳性患儿中，DNA阳性44例。31例患儿EBV CA IgG阳性，其中25例DNA阳性。19例患者EBV CA IgG和EBV NA IgG联合感染模式阳性，有17例患儿DNA阳性。48例EBV CA IgM和EBV NA IgG感染模式中，DNA阳性率仅为58.3%(28/48)。

表3 180例患儿血清抗体和EBV DNA检测结果比较

3 讨论

本研究通过回顾性分析2018年深圳市罗湖地区1 616例疑似EBV感染患儿病毒核酸检测结果，发现12岁以下儿童EBV抗体阳性率为25.6%，远低于近年来国内儿童EBV感染的平均水平，提示近年来深圳区儿童EBV感染已得到控制，可能与深圳市罗湖区经济发展水平较高，生活环境良好以及公共卫生知识普及广泛有关[5-6]。通过对不同年龄组患儿阳性率的分析发现，随着儿童年龄的增长，感染率呈上升趋势。学龄组儿童EBV感染率最高，可能与儿童之间互相传播有关，因为学龄组儿童比学龄前接触的人更多更复杂，增加了感染源和暴露机会。

多项调查研究表明EB病毒感染无性别差异[5-7]。本研究通过比较不同年龄段男女患儿的EBV感染率发现，婴儿组男童感染率略高于女童，而其他年龄组女童感染率普遍高于男童，各年龄组男女性别间差异无统计学意义(P>0.05)，提示儿童EBV感染与性别因素无关。查阅文献可知，EBV男性感染率普遍略高于女性[7]，而本文男童总体感染率(23.4%)低于女童(28.7%)，考虑为深圳罗湖区地处商业闹市区，除了户籍常住居民，就诊患者还包括大量外来流动人口。

通过对深圳市罗湖区儿童EBV感染季节分布发现，秋季是EBV感染高发时段(32.0%)，4个季节间的感染差异存在统计学意义，进而推断深圳罗湖区儿童EBV感染具有季节性。通过对413例EBV感染患儿临床病例分析发现,儿童EBV感染所致的疾病多种多样，症状轻重不一，累及全身多个器官，主要以呼吸系统疾病占主导，其中支气管肺炎占比最高(40.2%)，可能与EBV主要通过口腔分泌物和唾液传播相关，使原发性感染首先在咽部上皮细胞复制累及呼吸道进而扩散到其他部位。

EBV感染不同阶段产生的抗体有所差异。EBV CA IgM在感染后3周达到峰值，EBV CA IgG产生稍晚于EBV CA IgM。EBV DNA早于EBV CA IgM，并在2周后逐渐回落，此时EBV CA IgM逐渐上升。中晚期感染时EBV NA和EBV CA IgG转阳，EBV EA IgM阴性[7-9]。本研究检测的180例患儿中EBV DNA和IgM抗体检测结果相近,差异无统计学意义，考虑由于入院治疗前患儿已达病毒感染中期。EBV DNA检测有助于EBV感染早期诊断，而对于EBV现症感染，推荐采用EBV DNA和EBV CA IgM联合检测，以更好地了解病毒在儿童体内复制和感染的情况；对于既往感染，推荐采用EBV NA、EBV CA IgG和EBV DNA作为联合诊断指标。本研究通过EBV核酸载量检测，为深圳市罗湖地区儿童EBV 感染情况及临床表现提供参考，结合临床症状综合分析，明确诊断，以减少误诊、漏诊率，使患儿得到有效治疗。

综上所述，EBV是深圳市罗湖地区儿童感染的重要病原体，主要引起儿童呼吸系统感染，临床表现多样，症状轻重不一，学龄后儿童由于暴露率更大因而感染率相应增高。此外秋季(9、10、11月)感染是本地区儿童EBV感染的高发时段，应做好相应预防措施，并根据患儿的临床表现，联合患儿病毒核酸载量和血清学抗体检测及时诊断治疗，避免误诊、漏诊，使患儿得到及时有效的治疗。