付建兴 彭利洪 王燕玲

摘要：比较UPLC与HPLC测定注射用生长抑素含量的差异。UPLC色谱条件为：Waters C18柱（2.1×50 mm，1.7μm）、流速0.2 mL·min-1、进样体积2 μL;HPLC色谱条件为：Welch AQ-C18柱（250×4.6mm，5 μm）、流速1.5 mL·min-1、进样体积20 μL。两者流动相和检测波长均为1.1%磷酸溶液（pH2.3）-乙腈（75：25）和215nm。UPLC和HPLC定量限分别为0.123 ng和126.8 ng，说明UPLC灵敏度更高，运行时间缩短至HPLC的1/3，提高检验效率、节约检验试剂、减少废液产生。线性试验证明溶液浓度在0.05～0.15mg·mL-1范围，主峰面积能够与进样浓度呈良好的线性关系。准确度试验UPLC与HPLC测定的含量平均值分别为99.83%和100.43%，RSD为0.25%和0.36%，符合规定要求。重复性试验UPLC与HPLC测定的主峰面积RSD均为0.2%，说明系统重复性良好。因此UPLC测定注射用生长抑素含量可靠、高效，符合相关要求。

关键词：超高效液相色谱（UPLC）;高效液相色谱（HPLC）;注射用生长抑素;含量

生长抑素最早由Krulich等在大鼠下丘脑发现，其化学组成为Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH，是一种环状的神经调节肽[1-5]。注射用生长抑素（somatostatin for injection）主要用于严重急性食道静脉曲张出血，严重急性胃或十二指肠溃疡出血，或并发性急性糜烂性胃炎或出血性胃炎;胰腺外科手术后并发症的预防和治疗;胰、胆和肠瘘的辅助治疗;糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗[2]。高效液相色谱仪（HPLC）因其柱效高、分析速度快、灵敏度高等特点，在现阶段的医药、食品、化工等领域的检测中起着重要作用，但随着人们对药品质量要求的标准不断提高，药品UPLC的检验方式很快被人们所接受，药品质量的控制覆盖了药品研发设计、生产（中间体）、出厂（成品）、市场流通等全部环节，快速获得检测结果至关重要[3]。相对HPLC，超高效液相色谱仪（UPLC）具有更高的分离度、更快的流速和更高的灵敏度，即UPLC法在提高检出能力的条件下，检测时间更短，尤其在多肽类大分子药物的检测以及临床测定血药浓度的过程中优势更为明显[4]，对于生产企业减少检验等待时间，在保证半成品质量的前提下，能够大幅度节约企业综合能耗、节约成本，同时减少流动相使用量，降低环保压力。本研究针对注射用生长抑素含量测定分别用UPLC与HPLC法进行对比研究，从而确认UPLC法在注射用生长抑素含量检测中优势。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 原料及试剂

生长抑素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：140711-201705），注射用生长抑素（海南中和药业股份有限公司，批号：20180501），磷酸（分析纯），乙腈（色谱级），三乙胺（色谱级），超纯水。

1.1.2 主要仪器设备

Acquity UPLC H-Class型超高效液相色谱仪，美国沃特世公司;Alliance e2695型高效液相色谱仪，美国沃特世公司;CP225D型电子分析天平，德国赛多利斯集团;PB-21型酸度计，德国赛多利斯集团。

1.2 实验方法

1.2.1 溶液制备

取生长抑素对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得0.1 mg·mL-1溶液作为对照品溶液，并于2～8℃条件下保存;取注射用生长抑素适量，加水制成每1 mL中约含生长抑素0.1 mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，备用。

1.2.2 色谱条件

UPLC法色谱条件：Waters C18色谱柱（2.1×50 mm，1.7 μm），流速0.2 mL·min-1，进样体积2 μL;HPLC法色谱条件：Welch AQ-C18色谱柱（250×4.6 mm，5 ?m），流速1.5 mL·min-1，进样体积20 μL。

以上两种色谱系统的流动相均为1.1%磷酸溶液（取磷酸11 mL，加水800 mL，用三乙胺调节pH值至2.3，用水稀释至1000 mL）-乙腈（V磷酸溶液：V乙腈= 75：25），检测波长均为215 nm。

1.2.3 方法研究[5]

1.2.3.1专属性

取溶剂-水、对照品溶液和供试品溶液，按1.2.2色谱条件，分别进行UPLC、HPLC分析，记录色谱图。

1.2.3.2精密度（进样精密度、中间精密度）

取对照品溶液，按1.2.2色譜条件，分别进行UPLC、HPLC分析，连续进样6针，记录色谱图，计算UPLC、HPLC主峰面积RSD%。在不同日期、不同分析人员，按1.2.1项下重新配制对照品溶液1份，分别采用UPLC、HPLC按1.2.2色谱条件，连续进样6针，记录色谱图，计算UPLC、HPLC主峰面积RSD%。

1.2.3.3线性与范围、定量限（LOQ）

UPLC不同浓度供试品溶液：取生长抑素对照品18.75 mg，置5 mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取0.33、0.50、0.65、0.83、1.00 mL，分别置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成0.05、0.075、0.10、0.125、0.15 mg·mL-1供试品溶液，备用。

HPLC不同浓度供试品溶液：取生长抑素对照品20 mg，置10 mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL，分别置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg·mL-1供试品溶液，备用。

按1.2.2色谱条件，采用UPLC和HPLC法，精密量取以上供试品溶液，注入色谱仪，记录色谱图，以主峰面积与浓度进行线性回归分析。

取线性最低浓度的对照品溶液逐倍稀释，按信噪比（S/N）约为10：1时相应的浓度和注入色谱仪的体积，计算定量限。

1.2.3.4 准确度

精密称取生长抑素对照品约16、20、24 mg各三份，分别置于200 mL量瓶中，相应加入0.7、0.8、1.0 mL的20%甘露醇注射液，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即配制标示浓度（0.1 mg·mL-1）的80%、100%、120%供试品溶液（0.08、0.10、0.12 mg·mL-1）。另精密称取生长抑素对照品10 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并至刻度，摇匀，制备每1 mL中约含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。取以上供试品溶液和对照品溶液，采用UPLC和HPLC法分析，记录色谱图，计算回收率。

1.2.3.5耐用性

耐用性试验是考察在色谱条件有微小改变、仪器波动的情况下，测定主成分含量受到的影响程度，从而证明检测方法的耐用性强弱。一般色谱条件调整的项目为不同色谱柱、流速±10%、柱温±5℃等。UPLC法色谱条件的改变包括色谱柱批号（EA904和EB539）、流速（0.15、0.20、0.25 mL·min -1）及柱温（25、30、35 ℃）;HPLC法色谱条件的改变包括色谱柱品牌（Welch AQ，CAPCELL PAK）、流速（1.3、1.5、1.7 mL·min -1）、柱温（25、30、35 ℃）。在UPLC和HPLC色谱条件下，改变以上单因素色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算注射用生长抑素含量。

2 结果与讨论

2.1 专属性

从图1-图3可以看出，在UPLC和HPLC色谱条件下，溶剂峰分别在1.0、3.0 min之前出峰（图1），对照品溶液主峰保留时间为3.696、12.627 min（图2）以及供试品溶液主峰保留时间为3.687、12.526 min（图3）。专属性证明溶剂峰对主峰无干扰，供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间一致，专属性好，可用专属鉴别试验。与HPLC法比较，UPLC理论板数为HPLC两倍，运行时间缩短至HPLC分析时间1/3。与张承军等文献[2]比较，运行时间基本一致。

2.2 精密度（进样精密度、中间精密度）

从表1可以看出，进样精密度UPLC、HPLC法测定的主峰面积RSD%均为0.2%小于2.0%。中间精密度UPLC、HPLC法的主峰面积RSD%分别为0.1%和0.9%，均小于2.0%。证明UPLC和HPLC系统精密度均良好。

2.3 线性与范围、定量限（LOQ）

从表2可以看出，UPLC和HPLC法的检测范围分别为0.05～0.15 mg·mL-1和0.04～0.20 mg·mL-1，主峰面积与供试品溶液浓度呈良好的线性关系（图4），其相关系数均大于0.999;而定量限分别为0.123ng和126.8ng，说明UPLC的灵敏度明显高于HPLC。李岑等文献[3]表明UPLC的高灵敏度在临床试验过程中检测血药浓度具有很大优势，HPLC无法准确测定低浓度药物含量。

2.4 准确度

从表3可以看出，UPLC和HPLC测定注射用生长抑素含量，其平均值分别为99.83%和100.43%，均在规定的98.0%～102.0%范围内;两种方法测定含量结果的RSD%分别为0.25%和0.36%均小于2.0%，说明两种测定方法的准确度均较好。与张承军等文献[2]比较，平均值99.1%，与本文一致，但RSD为1.7%接近2.0%，则说明测定本品含量波动较大。

2.5 耐用性

测得含量均在90.0%～110.0%，且每个色谱体系不同色谱条件微调后检测结果的RSD%分别为0.48%和0.65%均小于2.0%，具体详见表4.。

3.结论

UPLC法测定注射用生长抑素含量具有专属性好、结果准确、操作简单等优点，并且大大缩短了检测时间。该法既保障了药品质量，又降低了生产成本，是一个可靠、准确、可重复的检测方法，更适用于注射用生长抑素的质量控制。

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