余蕙君　陈茜　刘青　周义文

【摘要】 目的：分析NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突變在正常染色体核型的急性髓细胞白血病（CN-AML）患者中应用的临床意义。方法：以2016年1月-2017年6月本院收治的100例急性髓细胞白血病患者作为研究对象，利用染色体核型分析G显带方法与基因检测PCR法进行NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变分析。分析以上四种基因突变的发生率，比较突变型和野生型患者的临床特征、总生存率及累积复发率。结果：NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变的发生率分别为22.0%、22.0%、13.0%、5.0%;NPM1突变型患者的WBC明显高于野生型，差异有统计学意义（P<0.05）;CEBPA突变型患者的完全缓解率明显高于野生型，差异有统计学意义（P<0.05）;FLT3-ITD突变型患者PB和BM明显高于野生型，PLT和完全缓解率明显低于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）;c-kit突变型患者PLT明显低于野生型，PB和BM明显高于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）;NPM1突变型总生存率明显高于野生型，CEBPA突变型总生存率明显高于野生型，累积复发率明显低于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：急性髓细胞白血病存在一定比例的基因突变，NPM1、CEBPA突变率相对较高，FLT3-ITD及c-kit基因突变患者的PLT较低，BM原始细胞比例较高，且NPM1、CEBPA突变能够评估预后，具有一定的临床研究意义。

【关键词】 基因突变型; 野生型; 急性髓细胞白血病; 临床意义

Clinical Significance of NPM1，CEBPA，FLT3-ITD and c-kit Genes Mutations in Normal Karyotypes Acute Myeloid Leukemia/YU Huijun，CHEN Xi，LIU Qing，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（21）：013-017

【Abstract】 Objective：To analyze the clinical significance of NPM1，CEBPA，FLT3-ITD and c-kit gene mutations in patients with normal karyotype acute myeloid leukemia（CN-AML）.Method：A total of 100 patients with acute myeloid leukemia admitted to our hospital from January 2016 to June 2017 were selected as the study subjects.Chromosome nucleus types were analyzed by G-banding technique.NPM1，CEBPA，FLT3-ITD

and c-kit gene mutations were detected by genomic PCR.The incidence of the four gene mutations，and compare the clinical characteristics，overall survival rate and cumulative recurrence rate of mutant and wild type patients were analyzed.Result：The mutation rates of NPM1，CEBPA，FLT3-ITD and c-kit genes were 22.0%，22.0%，13.0% and 5.0% respectively.WBC of NPM1 mutation patients was significantly higher than that of wild type patients（P<0.05）.Complete remission rate of CEBPA mutation patients was significantly higher than that of wild type patients（P<0.05）.PB and BM of FLT3-ITD mutation patients were significantly higher than those of wild type patients（P<0.05）.The PLT and complete remission rate of the c-kit mutant were significantly lower than those of the wild type（P<0.05）.The PLT of the c-kit mutant was significantly lower than that of the wild type，PB and BM were significantly higher than those of the wild type（P<0.05）.The total survival rate of NPM1 mutant was significantly higher than that of the wild type，the total survival rate of CEBPA mutant was significantly higher than that of the wild type，and the cumulative recurrence rate was significantly lower in wild type，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Acute myeloid leukemia has a certain proportion of gene mutations.NPM1 and CEBPA mutations are relatively high，PLT of FLT3-ITD and c-kit mutations are low，BM primordial cells are high，and NPM1 and CEBPA mutations can evaluate prognosis，which has a certain clinical significance.

【Key words】 Gene mutation; Wild type; Acute myeloid leukemia; Clinical significance

First-authors address：Shenzhen Hospital of Southern Medical University，Shenzhen 518100，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.21.004

多项研究表明NPM1、CEBPA、FLT3-ITD基因突变在急性髓细胞白血病中具有独立的预后意义，c-kit基因突变多存在于核心因子相关的急性白血病中，在正常染色体核型的急性髓细胞白血病中的研究较少。本文以部分急性髓细胞白血病患者作为研究对象，分析NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变情况，并根据以上四种基因的变化评估患者的总生存率和累积复发率[1-2]，旨在为急性髓细胞白血病的治疗和预后提供有价值的参考依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2016年1月-2017年6月本院收治的100例急性髓细胞白血病患者作为研究对象。纳入标准：符合世界卫生组织2008年造血及淋巴组织肿瘤的分类中急性髓细胞白血病的诊断标准;临床资料完整;可配合检查。排除标准：其他血液疾病;其他影响结果的基因类疾病者。100例患者中，男58例，女42例;年龄12～86岁，平均（45.8±6.2）岁。患者在入组前经健康宣教，对研究知情同意并签署知情同意书，后经本院医学伦理委员会批准实施。

1.2 方法 在无菌条件下采集患者骨髓5 mL，染色体常规短期培养、制片，姬姆萨染色G显带分析方法。然后运用基因组PCR进行NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变检测。分析以上四种基因突变的发生率，比较突变型和野生型患者的临床特征、总生存率及累积复发率，分析NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变在急性髓细胞白血病治疗和预后中的价值和意义。

1.3 采用SPSS 16.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用M（P25，P75）表示，连续变量比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2或Fisher精确检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 急性髓细胞白血病4种基因突变的发生情况比较 NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变的发生率分别为22.0%（22例）、22.0%（22例）、13.0%（13例）、5.0%（5例），NPM1、CEBPA同突变的有5例患者，NPM1、FLT3-ITD同突变的有4例患者，FLT3-ITD、c-kit同突变的有2例患者，CEBPA、c-kit同突变的有2例患者，CEBPA、FLT3-ITD及c-kit同突变的有1例患者。

2.2 不同基因突变型与野生型患者临床特征比较 NPM1突变型患者的WBC明显高于野生型，差異有统计学意义（P<0.05）;CEBPA突变型患者的完全缓解率明显高于野生型，差异有统计学意义（P<0.05）;FLT3-ITD突变型患者PB和BM明显高于野生型，PLT和完全缓解率明显低于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）;c-kit突变型患者PLT明显低于野生型，PB和BM明显高于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.3 不同基因突变与野生型患者总生存率与累积复发率对比情况 NPM1突变型总生存率明显高于野生型，CEBPA突变型总生存率明显高于野生型，累积复发率明显低于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

3 讨论

近年来随着人们生活环境和生活方式的改变，急性白血病的发生率有显著升高趋势，对患者的生活质量产生严重不良影响[3]。急性白血病的临床分型以细胞形态学为基础，结合免疫学、细胞遗传学及分子诊断学，在疾病的治疗和预后中具有重要意义。大多数白血病患者存在克隆性染色体异常，并会累及到相应的基因突变，在临床上以此作为细胞遗传学特点，可对疾病进行辅助诊断和治疗，并能够评估患者的预后[4-5]。细胞遗传学诊断技术中比较常见的是染色体核型分析技术，主要为了检测白血病患者是否存在染色体方面的异常，将患者的血液或骨髓短期培养后经系列处理获得染色体，核型命名及描述根据《人类细胞基因组学国际命名体系（ISCN 2016）》[6]。急性白血病患者通过常规核型分析可检出克隆性的染色体异常，不同研究学者利用细胞遗传学技术检测成人急性白血病患者异常染色体的检出率存在一定差异，这与患者的年龄、白血病类型以及地理环境等因素均有一定联系[7]。

细胞遗传学针对正常染色体核型的急性髓细胞白血病患者而言在临床上有很大的异质性，对其预后因素虽然有部分学者进行了相关研究，仍需进一步探索[8]。NPM1突变是急性髓细胞白血病患者中比较常见的，可与多种基因同时发生突变，例如PLT3-ITD和DN-MT3A等，与CEBTA共突变的概率较低[9-10]。NPM1与某些肿瘤抑制蛋白的活化与稳定有关，突变时会导致核仁磷酸蛋白在细胞质中异常定位[11]。本组研究中NPM1突变率为22.0%，低于国外的相关报道，分析原因可能是人种的差异、检测方法敏感性的差异以及入选样本病例数等。CEBPA在正常染色体核型的急性髓细胞白血病中的突变比较常见，是调节骨髓增殖的关键转录因子[12]。CEBPA在正常染色体核型的急性髓细胞白血病中突变特点为双等位基因突变，通过分子机制研究发现p42缺失表达和复杂杂合突变影响骨髓造血，导致急性白血病的发生[13]。根据相关数据调研显示，PLT3-ITD在急性髓细胞白血病中的突变率为20%～27%，该基因在正常造血祖细胞中表达，与造血细胞的分化、增殖以及凋亡等有关[14-15]。本研究中当急性髓细胞白血病发生PLT3-ITD突变时，患者外周血和骨髓中原始细胞的比例明显升高，血小板计数PLT和完全缓解率CR明显降低，可能是由于ITD位于FLT3酪氨酸激酶近膜区域，导致这一区域的空间构型改变及氨基酸序列的串联重复，破坏了这一区域对TK的自体抑制活性，从而导致细胞的过度增殖和凋亡受抑[16-17]。c-kit基因是Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员之一，主要通过一些信号通路参与造血干细胞增殖分化的调控，有研究认为c-kit基因突变的存在极大地增加了白血病复发风险，导致生存率下降[18];但c-kit基因突变在正常染色体核型的急性髓细胞白血病中的研究相对较少，需要进一步深入研究。

本研究以NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变在正常染色体核型的急性髓细胞白血病（CN-AML）患者中的应用进行深入研究，选取2016年1月-2017年6月本院收治的100例急性髓细胞白血病患者作为研究对象，分析NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变的发生率，并比较突变型和野生型患者的临床特征、总生存率及累积复发率。研究数据显示，NPM1、CEBPA、FLT3-ITD及c-kit基因突变的发生率分别为22.0%、22.0%、13.0%、5.0%，NPM1、CEBPA同突变的有5例患者，NPM1、FLT3-ITD同突变的有4例患者，FLT3-ITD、c-kit同突变的有2例患者，CEBPA、c-kit同突变的有2例患者，CEBPA、FLT3-ITD及c-kit同突变的有1例患者;NPM1突变型患者的WBC明显高于野生型，差异有统计学意义（P<0.05）;CEBPA突变型患者的完全缓解率明显高于野生型，差异有统计学意义（P<0.05）;

FLT3-ITD突变型患者PB和BM明显高于野生型，PLT和完全缓解率明显低于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）;c-kit突变型患者PLT明显低于野生型，PB和BM明显高于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）;NPM1突变型总生存率明显高于野生型，CEBPA突变型总生存率明显高于野生型，累积复发率明显低于野生型，差异均有统计学意义（P<0.05）。以上数据说明急性髓细胞白血病NPM1突变患者的白细胞计数WBC会明显升高，但总生存期得到明显提升;CEBPA突变型患者与野生型相比，完全缓解率CR和总生存率明显提升，累积复发率明显降低;FLT3-ITD突变型患者与野生型相比，血小板计数PLT和完全缓解率CR明显降低，外周血PB和原始细胞比例BM明显提升;c-kit基因突变型患者与野生型相比血小板计数PLT明显降低，外周血PB和原始细胞比例BM明显提升;通过以上数据得出的结论能够对急性髓细胞白血病进行诊断、治疗以及预后等进行评估，提高急性髓细胞白血病的诊疗及预后效果[19-20]。

综上所述，急性髓细胞白血病存在一定比例的基因突变，NPM1、CEBPA突变率相对较高，FLT3-ITD及c-kit基因突变患者的PLT较低，BM原始细胞比例较高，且NPM1、CEBPA突变能够评估预后，具有一定的临床研究意义。

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（收稿日期：2019-07-01） （本文编辑：程旭然）