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(1.福建省水产研究所,福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室,福建厦门 361013; 2.福建省海洋生物资源开发利用协同创新中心,福建厦门 361013; 3.华侨大学生物化工学院,福建厦门 361021; 4.宁德师范学院生物系,福建宁德 352100)

抗氧化多肽具有减缓或防止生物大分子过氧化以及清除体内自由基的功效,其活性与特定氨基酸组成、序列排布和空间构象密切相关[6-7]。利用蛋白酶水解有利于大分子蛋白质中抗氧化氨基酸的暴露,同时蛋白来源、蛋白酶类型、水解程度和预处理工艺等因素亦决定了酶解多肽的抗氧化活性[8-9]。研究发现,海参体壁酶解多肽具有显著的体外抗氧化活性[10-12],然而目前尚未有对养殖刺参,特别是南方新兴规模化养殖刺参的酶解多肽工艺优化及抗氧化活性研究。

因此,本研究以福建养殖仿刺参(Apostichopusjaponicus)体壁为原料,选择水解度、体外DPPH自由基清除率为评价指标,从6种蛋白酶中筛选出制备仿刺参抗氧化多肽的最适蛋白水解酶;以单因素法、Box Behnken响应面设计法优化酶解工艺;测定仿刺参酶解多肽的体外抗氧化活性;进一步探讨仿刺参抗氧化多肽对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926氧化应激损伤的保护效应,以期为仿刺参营养价值开发与商业增值转化提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

仿刺参(Apostichopusjaponicus) 重量在200～300 g之间,福建省宁德市霞浦县利丰达水产有限公司;DMEM液体培养基、胎牛血清、杜氏磷酸盐缓冲液(D-PBS)、青-链霉素、胰酶细胞消化液 美国Hyclone公司;DMSO、MTS、HAT培养基添加……