焦 玲，谢 定，文 李，姜 博，陈 平，郑瑞娜

（长沙理工大学 化学与生物工程学院，长沙 湖南410114）

乙酸乙酯又名醋酸乙酯，英文名Ethyl Acetate，具有水果香味，外观为无色透明液体。乙酸乙酯是一种非常重要的有机化工原料，同时，还是酿酒行业常用的调香物质，存在于所有的白酒之中[1，3]。目前在我国乙酸乙酯的生产基本上都是通过传统方式在无机催化剂存在条件下化学合成，国际上也有少量从天然植物中分离提取方法来获得[2]。而和化学合成法相比，酶法生物合成的乙酸乙酯不仅被认为是高质量的天然产品，而且具有反应条件温和、转化率高、专一性好、易提取、易控制等优点，被看成是很有希望工业化的新途径[3]。稻米脂肪酶是一类具有高活性的可以催化多种物质的生物催化剂，利用酵母展示技术，本实验室在人工合成酵母菌壁蛋白 （GCW14）与稻米脂肪酶 （RL）组合基因（GCW14-RL）后，将其亚克隆到pPIC9k载体后转化到GS115酵母菌中，成功构建了pPIC9k-GCW14-Rlipase载体，并将RL展示在毕赤酵母GS115表面[4-5]，再将其进行应用。

本文作者将高密度发酵得到的毕赤酵母发酵液通过冷冻离心制得酵母全细胞[5]，再将其用于催化，确定了反应最佳的稻米脂肪酶的酶活、底物摩尔比、反应温度、反应时间和3A分子筛添加量等，以及采用不同来源的脂肪酶对催化合成乙酸乙酯的影响。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

化学试剂：乙酸正戊酯（色谱纯）：TCI（上海）化成工业发展有限公司产品；乙酸乙酯（色谱纯）：天津市化学试剂研究所提供。……