呋喃西林代谢物半抗原的制备及其免疫检测中的应用
2018-04-24李斌俞思明胡睿于淑娟
李斌,俞思明,胡睿,于淑娟
(1.华南理工大学食品科学与工程学院,广东广州 510640)(2.广州润坤生物科技有限公司,广东广州 510800)(3.暨南大学生物材料广东高校重点实验室,生物医学工程系,广东广州 510632)
呋喃西林属于硝基呋喃类药物,近年来频繁用于水产类养殖和禽类养殖[12]。硝基呋喃类药物进入动物体内后,快速代谢为氨基脲(Semicarbazide,SEM),具有致畸、致突变和致癌作用[3]。欧美和我国相继公布了禁止使用硝基呋喃类药物的法令,并明确了其代谢物的最高残留量为0.25 μg/L[4]。
现阶段有关呋喃西林代谢物残留的检测技术主要有:高效液相(HPLC)、液相质谱(LC-Ms或LC-Ms/Ms)、高效气相(GC)、气相质谱(GC-Ms)和免疫分析技术。前四种技术主要是通过 SEM 与邻硝基苯甲醛过夜衍生后,用仪器测定其衍生物(2-NPSEM)[5~7]。色谱技术的样本处理较繁琐费时,需昂贵的仪器设备,且需要专业分析人员操作,不适合大批量的样本筛查,无法满足现有市场的需求。酶联免疫分析技术作为一种快速、高灵敏度、高特异性的检测方法,正广泛应用于有毒、有害药物的残留检测。
免疫分析技术的关键是生物原材料(抗原、抗体)的制备,其性能决定了快检产品的质量。由于呋喃西林代谢物(SEM)分子量较小,只具有反应原性,免疫时必须与大分子载体偶联,制备成人工合成抗原后才能获得免疫原性,从而刺激动物机体产生特异性抗体[8]。Cooper等[9]用羧基苯甲醛制备了SEM衍生物的多克隆抗体,并建立了检测SEM残留的ELISA法,在鸡肉中的检测限为0.25 μg/L。李军平[10]用3-羧基苯甲醛与 SEM 衍生制备了半抗原,通过偶联蛋白后免疫小鼠制备了单克隆抗体,其IC50值为31.25 μg/L。……
