张琳++周润天++李兴华

摘要：目的考察不同提取方法对生、制骨碎补中总黄酮提取效果的影响。方法分别采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法对骨碎补生品和砂烫品进行提取，通过紫外-可见分光光度（UV-Vis）法检测总黄酮的含量。结果回流提取法测得的总黄酮含量最高。结论骨碎补中总黄酮的提取方法以回流提取法为佳。

关键词：骨碎补；总黄酮；提取方法

中图分类号：R284文献标志码：B文章编号：1007-2349（2016）11-0075-02

骨碎补是较常用中药，具有补肾强骨、养伤止痛之功效，用于肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨伤折等症[1]。其活性成分是以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物[2]。笔者采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法3种方法提取生、制骨碎补中总黄酮的含量，以比较不同提取方法对总黄酮提出量的影响。

1实验材料

1.1仪器752紫外分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。

1.2药品骨碎补药材（购于亳州市药材总公司第二中药批发部）；骨碎补生品和砂烫品均按《中国药典》一部方法制备[1]。柚皮苷（批号110722-201312，购于中国药品生物制品检定所）；甲醇为AR级。

2方法与结果

2.1样品提取方法

2.1.1超声提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL，超声提取1 h。提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL。

2.1.2索氏提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，置于索氏提取器中，加80 mL甲醇，抽提1 h，将提取液转移至100 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度。

2.1.3回流提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL水浴回流提取1 h，提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

2.2总黄酮含量测定

2.2.1供试品溶液的制备精密吸取上述三种提取方法提取液各1 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为供试品溶液。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取柚皮苷标准品4.9 mg，置于50 mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，作为对照品溶液（0.098 mg/mL）。

2.2.3标准曲线制备精密吸取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5.、3.0 mL置于10 mL容量瓶中，分别以甲醇定容至刻度，以甲醇为空白在283 nm处测定吸收度。以吸收值（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，得标准曲线回归方程：A=0.052C+0.0208，r=0.9996，线性范围为4.9～19.6 ug/mL。

2.2.4精密度试验取对照品溶液，进行6次平行实验，测定含量。结果表明RSD为0.36%（n=6），精密度良好。

2.2.5重复性试验取同一批骨碎补生品粗粉，按超声提取法制备供试品溶液，并测定含量，结果表明RSD为2.96%。

2.2.6稳定性试验取同一供试品溶液5份，分别在0、30、60、90、120 min时测定A值，结果表明RSD为0.55%，供试品溶液在2 h内稳定。

2.2.7加样回收率试验精密称取已知总黄酮含量（1.34%）的骨碎补生品粗粉5份，每份0.2 g，分别精密加入1.29 mg/mL柚皮苷对照品溶液2 mL，按超声提取法制备供试品溶液，并测定含量，计算回收率，平均回收率为98.05%，RSD为2.43%。

2.2.8各样品的含量测定分别取上述各供试品溶液，以甲醇为空白，283 nm为测定波长，测定吸收值。将测得的吸收值A代入回归方程，计算浓度，结果见表2。

2讨论

从以上实验结果来看，在三种提取方法中，用回流法提取最好，快速提取率高，索氏提取法其次，超声法提取率最低。

参考文献：

[1]国家药典委员.中华人民共和国药典.一部[M].北京：中国医药科技出版社：2010：239-240.

[2]周铜水，周荣汉.骨碎补对大鼠实验性骨损伤愈合的影响[J].中草药，1994，25（5）：249-251.

（收稿日期：2016-07-16）