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海南黎药冰糖草药材质量标准研究

2016-12-26谭小玉

中国民族民间医药·上半月 2016年11期
关键词:总黄酮质量标准

谭小玉

【摘要】目的:建立海南黎药冰糖草的质量标准。方法:研究海南黎药冰糖草药材的性状鉴别,采用紫外分光光度法测定冰糖草中总黄酮的含量,并对冰糖草的水分、灰分、浸出物进行测定。结果:对冰糖草的质量标准进行初步研究,建立了性状鉴别、总黄酮含量测定的方法,并确定了冰糖草药材水分、灰分、浸出物的限量。结论:所建立的方法准确、可靠、稳定,可为制定黎药冰糖草质量标准提供参考。

【关键词】冰糖草;总黄酮;质量标准

【中图分类号】R248.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2016)21-0020-03

Study on Quality Standards of Hainan Li Folk Medicine Scoparia dulcis L.

TAN Xiaoyu

Pharmaceutical Institute of Hainan Province, Haikou 570311, China

Abstract:Objective To study quality standards for Scoparia dulcis L.. Methods Scoparia dulcis L. was identified by morphological identification. Total flavonoids were determined by ultraviolet spectrophotometry (UV). Determination of moisture, ash and extractives were studies. Results Preliminary study on Quality Standards of Scoparia dulcis L. Morphological identification and quantitative method for the determination of total flavonoids by UV were established. Limit of moisture, ash and extractives in Scoparia dulcis L. were determined. Conclusion The method accurate, reliable and stability can be used for the quality standards of Scoparia dulcis L.

Keywords:Scoparia dulcis L.;Total Flavonoids;Quality Standards

冰糖草为玄参科野甘草属植物野甘草Scoparia dulcis L.的全草,喜生于村旁、菜园、平地,分布于海南各地,广东、广西、云南、福建等省区亦有分布。冰糖草具有清热利湿、散风止痒的功效,常用来治感冒,肠炎,小便不利、热痱,皮肤湿疹等。据载可解木薯中毒[1]。海南黎族民间常用其配方入药治疗疾病。有文献对其化学成分[2-6],如总黄酮、总酚酸、挥发油等进行分析研究,对其药理作用的研究也有见报道[7-8]。但国家尚未制定冰糖草的质量控制标准。对产自海南地区黎族民间常用于配方用药的冰糖草进行研究,包含性状、水分、灰分、浸出物、含量测定等项,可为药材的质量控制提供依据。

1仪器与材料

1.1药材冰糖草全年可采,药材均采自海南省各市县,药材来源详见表1。

1.2材料芦丁对照品(批号:100080-200707,中国食品药品检定研究院,含量92.5 %);水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

1.3仪器 岛津UV-2401PC紫外分光光度计;岛津AUW220D电子天平;DHG-9203A型电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);SXZ-4-10N型箱式电阻炉(上海一恒科技有限公司);万能电子炉;SK250HP型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司);XMTE-8112型电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)。

2方法与结果

2.1药材性状鉴别本品全长约1m。根茎棕黄色,有弯曲,主根再生细根。茎黄白色,细长,多分枝,易折断,断面白色或黄白色。叶片长约3~8mm,灰绿色,易脱落,质脆易碎。花小,具丝状长梗,多脱落。蒴果浅褐色,球形,直径2~3mm,多开裂成2~4瓣,内含棕褐色种子,易碎。气微,味淡。如图1、图2所示。

2.2总黄酮含量的测定方法

2.2.1对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品(含量为92.5%)28.44mg置于100mL容量瓶中,加入70 %甲醇适量,超声微热溶解,冷却后加入70 %甲醇稀释至刻度,摇匀,配制成0.26307mg/mL的对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备取冰糖草粉末1g,加70%甲醇30mL,称定重量,回流提取1.5h,放冷,补重,过滤,收集续滤液,作为供试品溶液。

2.2.3显色方法精密吸取待测溶液2mL置25mL容量瓶中,加入5 %亚硝酸钠溶液1mL,摇匀,静置6min;再加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀,静置6min;再加4%氢氧化钠溶液10mL,用70%甲醇稀释至刻度,摇匀,静置15min,测定。

2.2.4测定波长的选择以芦丁为对照,按2.2.3项下显色方法加入显色剂,以相应溶剂为空白,置紫外扫描仪中,在400~800nm范围内进行扫描,确定最大吸收波长为508nm。如图3所示。

2.2.5 线性关系考察分别精密吸取芦丁甲醇溶液(0.26307mg/mL)0、0.5、1、2、4、8、10mL置25mL容量瓶中,按“2.2.3”项下显色方法加入显色剂,于508nm处测定吸收值(以不含芦丁的空白管对照调零做空白对照)。根据所测得的芦丁吸光度,以对照品浓度C(mg/mL)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线,得线性回归方程:A=11.73078C-0.00129(r2=0.99998),线性范围为0.00526~0.10523mg。芦丁在此范围内线性关系良好。

2.2.6精密度试验精密吸取供试品溶液2mL置25mL容量瓶中,按“2.2.3”项下显色方法加入显色剂,以相应溶剂为空白,于508nm处连续测定吸光度值6次, RSD=0.21%,结果表明该方法精密度良好。

2.2.7显色稳定性试验精密吸取供试品溶液2mL置25mL容量瓶中,按“2.2.3”项下显色方法加入显色剂,以相应溶剂为空白,于508nm处测定吸光度,记录0、10、20、40、60min时的吸光度值,结果表明该供试品溶液显色后放置10~20min内达到稳定,60min内RSD=2.97%,结果见表2。

2.2.8重复性试验密称取冰糖草粉末1g,共6份,平行按2.2.2项下方法制备供试品溶液,按“2.2.3”项下显色方法加入显色剂,于508nm处测定吸收值(以不含芦丁的空白管对照调零做空白对照)。结果表明,实验结果表明该方法重复性良好,RSD为1.64%。

2.2.9加样回收率试验通过向已知总黄酮含量的冰糖草药材中精密加入一定量的芦丁对照品溶液,依法制备供试品溶液和测定,计算,即得该方法的加样回收率结果。

精密称取芦丁对照品43.23mg,置于50mL容量瓶中,以70%甲醇溶解,稀释至刻度,摇匀,得芦丁储备液(0.7998mg/mL)。精密称取冰糖草粉末0.5g,共6份,添加芦丁储备液10mL(即芦丁对照品7.998mg),按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,精密移取供试品溶液2mL,按“2.2.3”项下显色方法加入显色剂,静置15min,于508nm处测定吸收值(以不含芦丁的空白管对照调零做空白对照),计算回收率。试验结果平均回收率为102.22%,RSD为0.89%。结果见表3。

2.2.10样品测定准确称取冰糖草粉末,每个批次重复称取3个样,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,精密移取供试品溶液2mL,按“2.2.3”项下显色方法,参照芦丁线性回归方程,测定冰糖草总黄酮含量。结果见表4。

2.3检查按《中华人民共和国药典》2015版四部通则0832第二法(烘干法)、通则2302、通则2201对采集的各批次冰糖草水分、总灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物、醇溶性浸出物进行测定。结果如下(表5):水分的测定结果为9.06%~9.36%;总灰分测定结果为4.982%~5.319%,酸不溶性灰分的测定结果为0.607%~0.633%;水溶性浸出物(热浸法)的测定结果为9.552%~10.014%;醇溶性(溶剂为95%乙醇)浸出物的测定结果为3.638%~3.757%

3讨论

冰糖草全株含黄酮类成分[2-4],NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法是常用的测定总黄酮含量的方法。它以Al(NO3)3 作为显色剂,在碱性条件下,与黄酮形成红色螯合物,以芦丁为对照,在其最大吸收波长处508nm测定吸光度值,从而得到待测物质总黄酮的含量[9]。

影响冰糖草总黄酮类物质提取效率的因素主要有溶剂、提取时间、提取次数等。为选择一种合适的提取冰糖草中总黄酮成分的方法,特针对提取溶剂、提取时间、提取次数设计实验,进行考察。试验结果为70%甲醇的提取效率最高;一次回流提取1.5h即可较为完全提取冰糖草中总黄酮类成分。故确定冰糖草总黄酮提取的最佳方案为70 %甲醇,回流提取1.5h。

通过对3个批次冰糖草中总黄酮的含量测定,最高含量为16.948mg/g,最低含量为14.841mg/g,可为后续研究提供参考。

采用2015版国家药典通则方法,对冰糖草药材的水分、灰分、浸出物进行检查,为了更好地控制药材质量,根据所测结果,建议水分不得过10 %,总灰分不得过6.0 %,酸不溶性灰分不得过0.7 %,水溶性浸出物(热浸法)不得低于8.0 %,醇溶性浸出物(95%乙醇)不得低于3.0 %。

参考文献

[1] 陈焕庸.海南植物志[M]. 北京:科学出版社, 1974: 497.

[2] 马雯芳, 邓慧连, 蔡毅, 等. 冰糖草总黄酮含量测定及显色方法优化[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(3): 112-115.

[3] 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草(第7册)[M].上海:上海科学技术出版社,1999:389.

[4] 万文婷,马运运,许利嘉,等.野甘草的现代研究概述和应用前景分析[J].中草药.2015,46(16):2492-2498.

[5] 陈丽珍, 艾朝晖, 蔡蓝洁, 等. 冰糖草中总酚酸的含量测定[J]. 中国民族民间医药, 2015, 24(10): 10-12.

[6] 姚亮, 黄健军. 冰糖草挥发油化学成分的GC-MS分析[J]. 中国实验方剂学杂志, 2012, 18 (5) : 101-103.

[7] 刘波, 陆明, 刘凡, 等. 野甘草乙醇提取物对胃H+/K+-ATP酶活性作用的研究[J]. 中国实用内科杂志, 2006, 26(2): 101.

[8] 刘波, 陆明, 刘凡. 野甘草乙醇提取物治疗大鼠胃溃疡作用的研究[J]. 现代中西医结合杂志, 2007, 16(19): 2654.

[9] 马陶陶,张群林,李俊.中药总黄酮的含量测定方法[J].安徽医药,2007,11(11):1030-1032.

(编辑:陶希睿)

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