周晨妍,刘振华,王丹丹,2,李同彪,高启禹

(1.新乡医学院生命科学技术学院，合成生物学改造工程与应用实验室,河南新乡 453000;2.新乡医学院三全学院,河南新乡453000)



产木聚糖酶毕赤酵母工程菌株构建及表达条件优化研究

周晨妍1,刘振华1,王丹丹1,2,李同彪1,高启禹1

(1.新乡医学院生命科学技术学院，合成生物学改造工程与应用实验室,河南新乡 453000;2.新乡医学院三全学院,河南新乡453000)

将黑曲霉XZ-3S木聚糖酶Xyn43A成熟肽基因插入表达载体pPIC9K,重组质粒SalⅠ线性化后分别电击转化2种毕赤酵母GS115和KM71,转化液经MD平板、G418浓度梯度平板和摇瓶复筛,获得两株重组菌GS115/Xyn43A(Mut+)和KM71/Xyn43A(Muts)。其中GS115/Xyn43A菌株最优表达条件为:甲醇浓度2.0%,接种时间24 h,诱导时间108 h,诱导温度30 ℃、诱导培养基初始pH6.3;KM71/Xyn43A菌株最优表达条件为:甲醇浓度1.75%,接种时间26 h,诱导时间132 h,诱导温度30 ℃、诱导培养基初始pH6.5。在最优表达条件下两重组菌GS115/Xyn43A和KM71/Xyn43A比酶活力分别可达139.36、143.29 U/mg。

黑曲霉,毕赤酵母,木聚糖酶,诱导表达

木聚糖酶作为一种十分重要的水解酶类[1],广泛应用于工业生产中[2-3]。自然界中木聚糖酶的来源非常广,很多细菌、真菌、放线菌等都可产生木聚糖酶[4-5]。木聚糖酶种类很多,分布于糖基水解酶GH5,7,8,10,11,16,43,52及62多个家族,目前报道的木聚糖酶主要归属于糖基水解酶GH10和GH11两大家族[6-8],其他家族的木聚糖酶报道偏少。

在前期的研究过程中,已从实验室保藏的黑曲霉(Aspergillusniger)XZ-3S中克隆出木聚糖酶Xyn43A基因,并对其进行了详细的生物信息学分析,前期研究发现它是一种新的木聚糖酶基因,属于糖基水解酶GH43家族[9]。……