程　妍,刘春莹,李泰厚,鱼红闪，*

(1.大连工业大学 生物工程学院,辽宁大连 116034;2.韩国庆熙大学 生命科学学院汉方药材料与加工,韩国京畿道龙仁市 446-701)



双亚基丹酚酸酯酶基因的表达载体构建及其生物转化

程妍1,刘春莹1,李泰厚2,鱼红闪1，*

(1.大连工业大学 生物工程学院,辽宁大连 116034;2.韩国庆熙大学 生命科学学院汉方药材料与加工,韩国京畿道龙仁市 446-701)

为了实现丹酚酸酯酶的外源性表达,利用了大肠杆菌和毕赤酵母两种表达系统,原核大肠杆菌采用pET 28a和pET 32a构建表达载体,并对重组大肠杆菌进行分别诱导表达和共表达;真核毕赤酵母采用pPIC9K构建共表达载体,对重组毕赤酵母进行诱导表达。研究结果表明,两种体系均能诱导表达出丹酚酸酯酶,蛋白在大肠杆菌系统中得到了高效表达,但未显示出该酶活力。毕赤酵母系统可使蛋白分泌性表达,表达产物具有一定的丹酚酸酯酶活力,但表达量不高。说明大肠杆菌系统体系更为适合大量表达丹酚酸酯酶,由此提供了一种该酶的外源表达方法。

丹酚酸酯酶,大肠杆菌,毕赤酵母,克隆表达

丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根及根茎,具有祛瘀通络,清心安神等功效[1]。近年来对丹参的药理活性研究表明,丹参中的丹参素,又名D(+)β-(3,4-二羟基苯基)乳酸,具有很强的抗脂质过氧化和清除自由基作用,是降低心肌梗死、抗动脉粥样硬化、抑制血栓形成的有效成分,在心脑血管系统疾病防治等方面应用广泛[2]。但天然丹参中丹参素的含量比较低(约0.5%),且丹参植物资源有限,这大大限制了丹参素类制剂的生产及研发。……