李军辉， 于　硕， 曹　罡， 张　焱， 杨文彬

(西安交通大学第二附属医院普通外科，西安　710004；*通讯作者，E-mail:wenbinsurgery@126.com)

Rac1基因在胰腺癌组织中表达及其临床意义

李军辉， 于硕， 曹罡， 张焱， 杨文彬*

(西安交通大学第二附属医院普通外科，西安710004；*通讯作者，E-mail:wenbinsurgery@126.com)

摘要：目的观察Rac1在胰腺癌组织及不同来源胰腺癌细胞中的表达情况，并检测其对癌细胞增殖和侵袭能力的影响。 方法应用免疫组化法检测Rac1在胰腺癌组织中表达，并将癌组织按T分期进行分组，观察Rac1表达与病理分期之间的关系。通过RT-PCR、Western blot检测胰腺癌细胞株Rac1表达情况。用Rac1中和抗体对培养癌细胞进行干预，未干预组作为对照，通过MTT、Transwell方法检测Rac1对细胞增殖及侵袭能力的影响。 结果与正常胰腺组织(0.07±0.17)相比，随着肿瘤分期的增加，Rac1在T1(0.37±0.08)，T2(0.47±0.07)，T3期(0.53±0.09)胰腺癌组织标本中表达呈上升趋势(P<0.01)。Rac1在5株细胞中均呈阳性表达，应用Rac1中和抗体对培养癌细胞干预24 h,48 h及72 h，癌细胞的增殖能力均出现明显下降，其累计光密度值分别为1.49±0.07，1.53±0.03，1.55±0.04，与未加抗体组相比，差异有统计学意义(P<0.01)。而培养20 h细胞的侵袭能力也明显降低，穿膜细胞数明显减少，与未加抗体组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。 结论Rac1在胰腺癌组织中高表达，并与肿瘤的分期明显相关。Rac1在胰腺癌细胞株中呈现普遍表达，可增强癌细胞的增殖及侵袭能力。

关键词：胰腺癌；Rac1；细胞增殖；细胞侵袭

胰腺癌恶性程度高，被称为“癌中之王”，是一种严重影响健康和生活质量的消化系统恶性肿瘤。在过去20余年中，胰腺癌发病率并没有减少趋势，在美国，2015年新发病例为48 960例，预期死亡人数为40 560例，死亡率居全部肿瘤死亡率的第4位，其中只有约8%的患者有切除的可能性，5年生存率<6%[1,2]。目前对于胰腺癌转移的具体机制研究很多，但仍不明了。Rac1(ras-related C3 botulinum toxin substrate 1)，中文名也叫Ras相关的C3肉毒素底物1。当Rac1激活后，可参与肌动蛋白应力纤维和黏附斑形成，促进细胞骨架结构重组，调节片状伪足与丝状伪足延伸，影响细胞的形体极化，增加细胞的运动迁徙。Rac1在胃癌组织标本中高表达，与胃癌的分化程度、预后明显相关，可增加癌细胞的增殖及侵袭能力，在头颈部肿瘤、卵巢肿瘤中亦出现高表达[3]。本研究拟检测Rac1在胰腺癌中的表达情况并观察其与胰腺癌转移的临床相关性。

1材料与方法

1.1临床资料

收集西安交通大学第二附属医院2001-01～2014-12的602例胰腺癌患者病例资料，其中男性377例，女性225例，年龄(61±12)岁。选择根治性手术并能找到病理标本的患者72例进行研究，正常胰腺组织标本6例作为对照组。

1.2主要试剂

DMEM培养基和胎牛血清购自GIBCO公司；Rac1抗体购自Sigma Chemical公司；MTT试剂购自Sigma Chemical公司；……