马一楠， 金迎迎*， 王亚利， 陈青娟， 卫　阳

(1西安交通大学第二附属医院肿瘤科，西安　710004； 2咸阳市中心医院肿瘤科； 3西安交通大学第二附属医院科研中心实验室； *通讯作者，E-mail:yingyingjin717@sina.com)

miR-141表达抑制增强结肠癌细胞对5-Fu药物敏感性的研究

马一楠1， 金迎迎1*， 王亚利1， 陈青娟2， 卫阳3

(1西安交通大学第二附属医院肿瘤科，西安710004；2咸阳市中心医院肿瘤科；3西安交通大学第二附属医院科研中心实验室；*通讯作者，E-mail:yingyingjin717@sina.com)

摘要：目的建立人结肠癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株，并探讨miR-141靶向作用PPP2R1B介导结肠癌细胞对5-Fu耐药的机制。方法通过药物敏感性实验，选取5-Fu敏感细胞COLO-320细胞株采取大剂量冲击联合剂量递增法，诱导筛选5-Fu耐药结肠癌细胞株，稳定传代。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测耐药细胞和亲本细胞的半数抑制浓度(IC50)。PCR的微阵列技术比较亲本细胞和5-Fu耐药细胞差异表达的miRNA分子，从中筛选出1个差异表达的miR-141分子。利用数据库Targetscan和miRBase database预测miR-141的靶基因为PPP2R1B，利用双荧光素酶报告基因检测进行鉴定。基因敲除miR-141后分析miR-141对PPP2R1B的调控作用。结果COLO-320细胞株经大剂量冲击联合剂量递增的方法诱导后可在5.0 μmol/L的5-Fu培养液中稳定增殖，具有耐药性，命名为COLO-320/5-Fu，该细胞株5-Fu的IC50显著高于亲代细胞(P<0.05)。芯片结果显示共有13个miRNAs在耐药细胞株中差异性表达，其中miRNA-141表达增加最为显著(P<0.05)。敲除该miR-141后，耐药细胞的5-Fu敏感性显著增加，凋亡比例增加(P<0.05)。结果显示,PPP2R1B为miR-141的靶基因，miRNA-141表达抑制显著上调PPP2R1B的表达水平并进而影响Akt磷酸化过程。结论本实验成功构建COLO-320/5-Fu耐药细胞株，miR-141可能通过靶向调控PPP2R1B，进而参与调控结肠癌细胞对5-Fu的耐药。

关键词：结肠癌；5-氟尿嘧啶；蛋白质磷酸酶2调节亚基1B；耐药性；微小RNA

结肠癌是严重危及人类健康的常见恶性肿瘤之一，美国癌症数据显示其发病率居全球第三，结肠癌相关死亡率位居全球第二[1]。5-氟尿嘧啶(5-Fu)是目前治疗结肠癌使用最广的化疗药物。其主要作用为通过阻断胸苷合成酶的活性，中断嘧啶胸苷的合成，进而影响肿瘤细胞DNA复制。……