刘正美， 周建奖， 赵　艳， 熊　林， 龙妮娅， 谢　渊*

(贵州医科大学 分子生物学重点实验室， 贵州 贵阳　550004)



幽门螺杆菌临床菌株的分离培养和鉴定*

刘正美**， 周建奖， 赵艳， 熊林， 龙妮娅， 谢渊***

(贵州医科大学 分子生物学重点实验室， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 建立一种幽门螺杆菌(H.pylori)临床菌株的分离培养的方法。方法: 取临床胃黏膜组织标本88株，接种于10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上，37 ℃、 5% O2 、10% CO2 、85% N2培养3～5 d后，挑取血平板上透明细小可疑菌落进行革兰氏染色和尿素酶试验,对阳性菌落进行扩大纯培养，提取细菌DNA，PCR扩增H.pylori 16sRNA、CagA基因，电泳并进行测序鉴定。结果: 成功从临床胃黏膜组织中分离培养出H.pylori，88例胃黏膜组织标本中分离培养并鉴定出H. pylori 19株，阳性率为22%；对16sRNA及CagA基因进行扩增，电泳可见目的条带，并对16sRNA扩增产物测序，与H.pylori国际标准菌株26695比对，同源性为95%～99%。结论： 37 ℃、 5% O2 、10% CO2 、85% N2条件下10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上能成功分离培养出H.pylori临床株。

[关键词]幽门螺杆菌; 分离培养; 临床菌株； 革兰染色； CagA基因

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是一种呈螺旋状或S形、微需氧的革兰氏阴性杆菌，由澳大利亚科学家Mashall和Warren于1983年从慢性胃炎病人的胃黏膜中首次分离并成功培养[1-2]。H.pylori是全球最常见的感染性病原菌之一，是慢性胃炎、胃溃疡的主要致病因素[3-4]，与胃癌的发生发展密切相关[5]。近年来的许多研究发现，H.pylori感染与心血管疾病、血液系统疾病、皮肤疾病以及口腔疾病等的发生密切相关[6-8]。目前流行病学研究显示，发达国家H.pylori的感染率为30%～50%，中国作为人口众多的发展中国家，是H.pylori的高感染区，H.pylori感染率高达40%～90%，平均为59%[9]。……