李 萍，方 霞，曹雨娜，陆惠娜，梁爱斌，张 虹

·论著·

卷曲螺旋结构域蛋白74B对纤毛生成和细胞周期调控作用研究

李 萍，方 霞，曹雨娜，陆惠娜，梁爱斌，张 虹

【摘要】背景卷曲螺旋结构域蛋白(CCDC)参与基因转录、细胞凋亡及细胞周期过程，并调控恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等多种生物学行为，然而多数CCDC的生物学功能目前尚未明确。目的探讨CCDC74B的细胞定位及对纤毛生成和细胞周期的影响。方法2013年3—9月通过构建在人视网膜色素上皮(RPE1)中的Tet-On表达系统,实现CCDC74B在细胞内的蛋白表达,然后通过细胞免疫荧光染色观察CCDC74B的细胞定位，通过小干扰RNA(siRNA)转染敲除CCDC74B在RPE1细胞中的表达，分为对照组、siRNA#1组、siRNA#2组，采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测CCDC74B mRNA 表达水平；采用细胞免疫荧光染色及流式细胞术观察下调CCDC74B表达后纤毛生成情况和对细胞周期分布的影响。结果在正常上皮细胞中，CCDC74B位于中心体，细胞免疫荧光染色示，下调CCDC74B表达后细胞初级纤毛生成。siRNA#1组及siRNA#2组转染后36 h及48 h纤毛生成率分别高于对照组(P<0.05)。RT-PCR法结果显示,siRNA#1组及siRNA#2组均有效抑制了CCDC74B mRNA表达。细胞免疫荧光染色示，下调CCDC74B表达后cyclin A表达减少，提示存在细胞周期停滞；流式细胞术检测示，下调CCDC74B表达后G1期细胞比例增高，S期及G2/M期细胞比例减少。结论中心体蛋白CCDC74B在细胞增殖过程中参与对纤毛生成和细胞周期的调控。

卷曲螺旋结构域蛋白(CCDC)是其序列中存在一个或数个卷曲螺旋结构域而被命名的一类蛋白[1]。CCDC结构折叠形式多变，可通过空间构象改变而实现许多不同的分子生物学功能，对细胞再生和存活、在细胞及分子的相互识别过程中起着确定性的作用。已有研究表明，部分CCDC参与基因转录、细胞凋亡及细胞周期过程，并调控恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等多种生物学行为[2-3]。CCDC有百余种，然而多数蛋白生物学功能目前尚未知。……