宋　笛，刘艳芝（.长春职业技术学院，吉林长春30033；2.吉林省农科院农业生物技术研究所，吉林长春30033）

芽孢杆菌弹性蛋白酶基因的克隆、表达及其大豆肽的制备能力鉴定

宋笛1，刘艳芝2，*
（1.长春职业技术学院，吉林长春130033；2.吉林省农科院农业生物技术研究所，吉林长春130033）

从芽孢杆菌中克隆得到弹性蛋白酶并命名为TX1，并连入pEAZY E1载体，构建了原核表达载体pEAZY E1-TX1。重组质粒导入大肠杆菌BL21后，经IPTG诱导基因表达。表达产物经Ni柱纯化后通过pH-stat测定其制备大豆肽的水解能力。序列分析结果表明TX1基因长度为1143bp，与Genbank上已报道序列（JQ305692.1）同源性最高为99.48%，产生的碱基突变不影响其氨基酸编码。蛋白表达分析结果表明，当IPTG浓度为0.3mmol·L-1，诱导4h蛋白表达量最高。经SDS-PAGE和Western分析结果表明，经Ni离子亲和层析纯化获得量大小为39.4ku的弹性蛋白酶His-TX1。初步确定其在50℃、pH为7.4反应4h时的大豆肽水解率最高，达到14.51%。

芽孢杆菌，弹性蛋白酶，克隆，大豆肽

尽管豆粕中含有丰富的蛋白质，但是作为大豆食用油生产的副产品，目前仍主要作为动物饲料使用。然而，通过蛋白酶消化、微生物发酵结合其他物理化学手段处理，可以将大豆和豆粕中的分子量较大的蛋白质降解为具有良好热稳定性、水溶性、乳化性、抗凝胶性、低粘度等理化性质的低分子活性肽（分子量＜1000u），即大豆肽。研究表明［1-2］大豆肽含有丰富的必须氨基酸、且非常利于人体吸收，除了能够作为食品添加剂改善食物口感，还能通过调节“负氮平衡”有效地缓解机体的缺氧、提高机体免疫力［3-5］，并能够通过抑制血管紧张素转换酶（ACE）的活性，控制高血压的形成［6-8］。……