广州市中医医院，广东 广州 510130

不同剂量痰热清对急性肺损伤大鼠肺匀浆内炎症因子的影响

林宏范小红陈群雄张智琳

广州市中医医院，广东 广州 510130

目的观察不同剂量痰热清对ALI大鼠肺匀浆内炎症因子的影响。方法雄性Wistar大鼠72只，随机分为4组，包括正常对照组(A组)、ALI模型组(B组)、常规剂量组(C组)、高剂量组(D组)，每组18只。后三组大鼠经尾注射脂多糖复制ALI模型。30min后经腹腔注射生理盐水、2.1ml/kg与4.2ml/kg的痰热清，每天给药1次，连续3d。每次给药后6h将每组的6只大鼠处死，取肺组织制成肺匀浆，检测MMP-9、 TNF-α、IL-6含量，并在光镜下观察肺组织病理变化。结果C、D两组与B组相比，肺匀浆MMP-9、TNF-α、IL-6含量有显著下降(P<0.05或P<0.01)， C、D两组之间差异不具有统计学意义(P>0.05)，而D组大鼠出现不良反应和死亡的情况较C组多。光镜下B组呈现ALI病理改变， C、D两组较B组有明显改善，两组间差异不具有统计学意义。结论痰热清可以降低ALI大鼠肺匀浆内的炎症因子水平，常规剂量和高剂量效果相当，但高剂量可能会导致不良反应增加。

急性肺损伤；痰热清注射液；大鼠；炎症因子

Ashbaugh于1967年首次对急性肺损伤(Acute Lung Injury，ALI)进行了报道，虽然是临床常见的严重性呼吸急症，但目前临床尚未明确其发病机制，有资料显示多种炎症因子在其发病过程中起重要作用。临床治疗上，西医尚无特异疗法，多给予液体复苏、呼吸管理、原发病治疗及感染控制治疗。

祖国传统医学虽然没有关于急性肺损伤的记载，但根据急性肺损伤的临床症状，应当属于“喘证、喘脱、暴喘”范畴。既往研究表明，中医药治疗急性肺损伤尚有一定疗效[1]。痰热清注射液是金银花、黄岑、连翘、羚羊角及熊胆粉等组成的中成药，有清热解毒、化痰解痉的作用，临床应用发现痰热清注射液对炎症因子有降低作用，可以减轻患者炎症反应，对肺部病理改变进行改善，对ALI有一定疗效[2]。本研究采取连续给药3d的治疗方式，对比观察不同剂量下痰热清对急性肺损伤大鼠肺匀浆液MMP-9(基质金属蛋白酶9)、TNF-α(肿瘤坏死因子α)、IL-6(白细胞介素6)水平的影响，统计不良发应，现具体报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 研究选用的动物为中山大学实验动物中心的雄性SPF级Wistar大鼠，共72只，体重180～220g。

1.2 实验试剂 选取美国Rapidbio(RB)公司的ELISA试剂盒作为MMP-9试剂盒。

1.3 分组实验方法 将实验大鼠随机分为四组：A组(正常组)，B组(急性肺损伤模型组)，C组(常规剂量组)，D组(高剂量组)，每组各18只。

1.4 实验模型制备 A组大鼠经尾静脉注射2ml/kg的生理盐水，B、C、D三组均静注5mg/kg脂多糖复制AIL模型。0.5h后经腹腔注射药物，A组生理盐水、B组生理盐水、C组2.1ml/kg痰热清(上海凯宝药业有限公司，国药准字Z20030054，20ml/支)、D组4.2ml/kg痰热清。每天早上注射1次，连续3d。所有大鼠用药剂量均按人的临床用药剂量折算。

1.5 实验取样 每次注射6h后，每组随机选取6只大鼠经腹腔注射0.3ml/100g的10%水合氯醛进行麻醉(注：A组第1d处死的大鼠为A1组，B组第1d处死的大鼠为B1组，A组第2d处死的大鼠为A2组，以此类推)，大鼠麻醉后行股动脉放血处死，开胸取1cm×1cm×1cm左肺中叶组织块，10%甲醛固定，常规石蜡包埋，切片后HE染色，经光镜对其形态学改变进行观察。另开胸取右肺中叶1g，加入9ml生理盐水，冰浴中匀浆30秒，于4摄氏度下3500rpm离心0.5h，取离心后上清液分装冻存，以此作为严重指标进行检测。

1.6 检测方法 应用ELISA法对大鼠肺匀浆MMP-9、TNF-α、IL-6水平进行检测。

2 结果

2.1 大鼠死亡情况 B组第1天死亡1只。C组第2天死亡1只。D组第1、2、3天各死亡1只。B、C组死亡率为5.6%，D组为16.7%。实验过程中，D组大鼠大部分大便稀溏、次数增多。

2.2 各组大鼠肺匀浆的MMP-9、TNF-α、IL-6含量分别见表1、表2和表3。

注：与A组比较，*P<0.05;与B组比较，#P<0.05。

表2 各组大鼠TNF-α水平(ng/l)

注：与A组比较，*P<0.05;与B组比较，#P<0.05，##P<0.01;与B1比较，△P<0.05;与C1比较，☆P<0.05；与D1比较，▲P<0.05。

表3 各组的IL-6含量(ng/L)

注：与A组比较，*P<0.05;与B组比较，#P<0.05，##P<0.01;与C1比较，△P<0.05。

2.3 光镜下肺组织病理改变情况 A组：大鼠肺组织呈粉红色，表面完整且光滑，可见完整的肺泡与支气管组织。

B组：大鼠肺组织表面有分数的点、片状出血坏死灶，标本切面有大量粉红色液体溢出，光镜下观察发现肺间质有充血、水肿症状，肺泡间隔增宽，肺毛细血管充血扩张，肺泡部分融合，肺泡腔内、肺间质有炎性细胞浸润现象，多中性粒细胞，少量淋巴细胞，有局灶性红细胞渗出。

C组：大鼠肺组织表面与B组大鼠相同，但范围小于B组。C1组大鼠光镜下实变范围、炎性细胞显著减少，肺泡内渗出性红细胞无减少。C2组大鼠光镜下肺实变范围减少明显，肺泡内渗出性红细胞少量增多。C3组大鼠光镜下肺实变范围、炎性细胞、渗出红细胞均少于其他两组。

D组：大鼠肺组织表面同B组。光镜下肺实变范围与C组相似，肺间质有充血、水肿症状，肺泡腔内、肺间质多炎性细胞浸润，多中性粒细胞，无成堆分布，局灶性红细胞渗出。D1～D3组病变依次减轻，其中D2、D3组细支气管、血管旁肥大细胞较多。

3 讨论

MMP-9是MMPs家族中重要的成员，是Ⅳ型胶原，主要分解基底膜，是构成毛细血管内皮及肺泡上皮细胞基底膜的主要成分，在基底膜损伤中有重要意义[3]。临床多项研究发现，痰热清可对急性肺损伤大鼠的肺泡灌洗液MMPs活性进行诱导以促使其升高，而且MMP-2与MMP-9的活性变化与肺病理形态学积分显著相关，并对肺间质及肺泡水肿的形成有促进作用，对痰热清诱导的过程中有重要意义[4]。TNF-α是早期主要的前炎症因子之一，它主要通过直接损伤内皮细胞、激活中性粒细胞聚集、抑制肺表面活性物质的形成等途径参与ALI的发生与发展[5]。ALI/ARDS患者的血液与肺部中IL-6水平均明显高于健康人群，研究同时发现，ALI大鼠肺匀浆与血浆中IL-6水平显著升高，与肺损伤病变程度呈正相关[6]。

本研究结果表明，C组与D组大鼠指标均于B组差异显著，说明常规剂量的痰热清与大剂量痰热清对肺MMP-9、IL-6及TNF-α均有降低作用，且效果无明显差异，各组的病理切片亦呈相应改变，这与我们之前的相关研究结果一致[7]。结果还发现，C2组与C1组大鼠TNF-α水平差异显著(P<0.05)，D3组与D1组大鼠TNF-α水平差异显著(P<0.05)，说明连续注射2～3d，大鼠TNF-α水平较第1d下降显著，但而MMP-9与IL-6均未出现类似TNF-α的变化，可能由于TNF-α作为早期前炎症因子，是炎性反应中释放最早且最重要的内源性介质[8]。说明痰热清早期应用对抑制早期体内TNF-α水平、减轻炎症反应对肺部损害有重要作用。

研究结果还表明，D组大鼠有腹泻症状，组内死亡大鼠数量均高于B组与C组。相关研究资料表明，痰热清临床应用不良反应中，消化系统不良反应高达15.8%，5.3%表现为过敏性休克，部分严重患者有喉头水肿的症状[9]。所以应注意高剂量痰热清引发不良反应的现象。

综上所述，本研究使我们发现常规剂量与高剂量痰热清对肺部炎症因子有降低作用，可以减轻肺部炎症症状，但值得注意的事高剂量痰热清应用的不良反应与死亡率偏高，临床应进一步关注研究。

[1]梁迪思，张智琳，江桂英，等.不同剂量痰热清注射液对急性肺损伤大鼠白细胞介素-6的影响[J].广东医学，2013,34(8)：1170-1172.

[2]陈昊，张丽葳，李文放，等.不同剂量乌司他丁对急性肺损伤大鼠MMP-9等炎症因子调控的研究[J].中国医药导报，2011,8(24)：15-18,25.

[3]常龙海，刘志群，范文昌，等.中药对急性肺损伤保护的药理作用及研究进展[J].临床合理用药杂志，2012,5(33)：153-154.

[4]闫龙，黄小民.痰热清注射液对急性肺损伤大鼠保护机制的实验研究[J].中国中医急症，2011,20(4)：587-589.

[5]吴海青，李涛平，徐健，等.间充质干细胞对脂多糖诱导急性肺损伤大鼠亲环素A表达的影响[J].国际药学研究杂志，2012,39(5)：425-429.

[6]黄继义，刘才文，林建东，等.TOLL样受体4对脂多糖致急性肺损伤大鼠炎症因子的影响[J].西南国防医药，2014,24(1)：23-26.

[7]张智琳，周丽梅，江沂，等. 清热化痰法对急性肺损伤大鼠干预作用的研究[J]. 实用医学杂志，2013，29(12)：1913-1915.

[8]庄先飞，俞苏岚，樊梦霖.中药复方防治急性肺损伤的作用机制研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2012,18(17)：326-331.

[9]李昌达，高东艳.盐酸戊乙奎醚预先给药对盐酸所致大鼠急性肺损伤时LXR-α表达的影响[J].当代医学，2012,18(13)：22-23.

广州市中医药科技项目,项目编号:20122A011008。

R285.5

A

1007-8517(2014)15-0017-02

2014.06.16)